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生化試驗培養基——酶類測定培養基和試劑(下)



錄入時間:2010-8-17 16:31:57 來源:青島龙8娱乐官方网站

7.馬尿酸鹽試驗培養基   

[用途]

測定細菌水解馬尿酸鈉能力。該培養基常用方法有2

(1)三氯化鐵法

[配法]

馬尿酸鈉1g ,肉湯100 ml

三氯化鐵試劑:三氯化鐵12g溶于2 %鹽酸100ml中。

將馬尿酸鈉和肉湯(pH 7.8 )加熱溶解后分裝于試管中,每管4ml121 ℃滅菌15 min 。冷卻后用玻璃蠟筆記錄培養基液面,置冰箱中備用。

[用法]

取純菌接種培養基,35 ℃培養48h ,觀察培養基液面。如液面下降時以蒸餾水補充之。離心沉淀,取上清液0.8ml加入三氯化鐵試劑0.2ml,立即混勻。經10-30 min觀察結果,出現穩定沉淀物為陽性。反之為陰性。

2 茚三酮法:

甘氨酸在茚三酮的作用下,經氧化脫氨基反應,生成氨、二氧化碳和相應的醛。而茚三酮則生成還原型茚三酮。反應過程中形成的氨和還原型茚三酮,與殘留的茚三酮起反應,形成紫色化合物。

8.觸酶試驗培養基

[用途]

用于鏈球菌及革蘭陽性球菌初步分群。

[用法]

1)玻片法:取18-24h 培養物,置于清潔玻片上,加1 3 %過氧化氫溶液,如產生大量氣泡為陽性。

(2)試管法:取瓊脂斜面(不含血液的)18-24h 培養物,接種于試管內,加入3 %過氧化氫溶液1ml,如產生大量氣泡為陽性。

[質量控制]

金黃色葡萄球菌ATCC 25923 陽性;無乳鏈球菌ATCC 13813 陰性。

9. β-半乳糖普(ONPG )試驗培養基

[用途]

用于乳糖遲緩發酵菌和不發酵菌的鑒別。

[配法]

試劑甲為0.01mol / L pH7.0

磷酸氫二鈉緩沖液100ml

試劑乙為蛋白胨3g ,氯化鈉1.5g,蒸餾水300mlpH 7.0

將試劑甲、乙分別置121 ℃滅菌15min ,冷至40-50 左右,試劑乙加入ONPG0.6g,置56 ℃水浴中加熱溶解,無菌過濾,將過濾液與試劑甲液合并分裝試管,每管2ml,做無菌試驗后備用。

[用法]

將標本接種培養基,35 ℃培養4-18h 。培養基呈黃色者為陽性,不變黃色為陰性。

[質量控制]

大腸埃希菌ATCC 25922 陽性;普通變形桿菌ATCC 13315 陰性。

注:ONPG 溶液不穩定,若培養基呈黃色即不可使用。

10 苯丙氨酸試驗培養基

[用途]

苯丙氨酸脫氨酶是變形桿菌屬、普羅威登斯菌屬和摩根菌屬所特有,可與腸桿菌科及其它細菌區別。也有助于種的鑒別,如苯丙酮酸莫拉菌呈陽性,其它莫拉菌屬的菌種呈陰性、

[配法]

DL-苯丙氨酸2g ,氯化鈉5g,酵母浸膏3g ,磷酸氫二鈉1g ,瓊脂12g ,蒸餾水1L

除瓊脂外其它的成分加熱溶解,調pH 7.3,再加入瓊脂溶解后分裝每管約4ml高壓滅菌121 15min置成斜面,凝固后4 ℃冰箱保存,備用。

[用法]

18-24h 培養物,大量接種于培養基,35 ℃孵育18-24h 后在培養試管中加入100g / L 三氯化鐵試劑4-5 滴,轉動使試劑布滿斜面,陽性者呈綠色,陰性者呈黃色。

[質量控制]

普通變形桿菌ATCC 13315 陽性;大腸埃希菌ATCC 25922 陰性

[保存]

4 ℃冰箱保存,2 周內用完。試劑可保存3 月。

注:

1)苯丙氨酸試驗須在加入三氯化鐵試劑后立即觀察,因綠色易很快褪去,無論陽性或陰性結果都必須在5min內作出判斷

( 2 )將斜面試管轉動,讓三氯化鐵試劑流動,可使反應較決顏色亦較明顯。

11 淀粉培養基

[用途]

用于鏈球菌和白喉棒狀桿菌的分型鑒定

[配法]

蛋白胨5g,牛肉浸膏3g,瓊脂(肉場培養基中不加)20g ,氯化鈉5g,蒸餾水1L ,可溶性淀粉20g ,小牛血清50ml

準確稱量前4 種成分加入500ml蒸餾水,緩漫加熱溶解制成基礎培養基。再將20g淀粉溶于250ml蒸餾水中。天然淀粉微溶于水,并不耐熱,切勿煮沸過度,防止淀粉水解。將上述兩種溶液合并混勻,補足水至1L 調pH 7.2 ,121 滅菌15min ,傾注平板備用。

附:Lugol碘液配制

1)貯存液:將碘化鉀10g 溶于100ml蒸餾水中,緩漫加入5g結晶碘不斷研磨振蕩直至溶解,裝入棕色瓶中。

2)應用液:用蒸餾水將貯存液1 : 5 稀釋,分裝于棕色瓶中,每隔1 月需新配制1 次,溶液呈深黃色

[用法]

18-24h 純培養物接種瓊脂平板,一般可接種幾個培養物。置35 ℃孵育。18-24h 或者直至出現足夠的生長物。將Lugol碘液直接加到孵育過的平板上,培養基呈深藍色,菌落周圍有透明圈為陽性,菌落周圍無透明圈為陰性。 [質量控制]

無乳鏈球菌陽性;產氣腸桿菌陰性

[保存]

4 ℃冰箱保存,2 周內用完。碘液易于褪色,使用前應進行質量控制。

注:

1)傾注好的淀粉瓊脂平板不直放冰箱中保存,培養基會變為不透明,可影響結果判斷。建議將培養基置螺旋帽的試管中保存,臨用時加熱溶解傾注平板,冷卻后使用

2)淀粉酶在pH 低于4.5 時不穩定

3)配制時,避免過熱,否則淀粉顆粒自動分解導致假陽性結果

4)培養時間應不少于36h


附:生化試驗培養基——酶類測定培養基和試劑(上)-點擊查看

 

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