[用途] 檢查細菌使氨基酸脫梭基形成胺使培養基變堿的能力。常用的氨基酸有賴氨酸、鳥氨酸和精氨酸。
[配法]
蛋白胨5g ,牛肉浸膏5g,溴甲酚紫0.1g ,甲酚紅0.005g,吡多醛(VB6 )0.005g,葡萄糖0.5g,蒸餾水1L。
加熱慢慢溶解,按10g / L 濃度加入所需要的氨基酸,調pH 至6.0 ,呈深亮紫色。分裝每支2ml,同時配對照管(不加氨基酸),高壓滅菌121 ℃15min ,冷卻后4 ℃冷藏備用。
[用法]
將試驗菌接種培養基,同時接種對照管1 支。并用滅菌的液體石蠟覆蓋,置35 ℃培養18-24h 。陽性菌初期由于細菌發酵葡萄糖產酸呈黃色,若繼續孵育,氨基酸經脫梭產生胺類使培養基變堿,指示劑改變顏色,呈紫色或紫紅色。陰性呈黃色或不變色
[質量控制]
賴氨酸脫羧酶:遲緩愛德華菌陽性,弗勞地枸椽酸菌陰性;鳥氨酸脫羧酶:產氣腸桿菌陽性,弗勞地枸椽酸菌陰性;精氨酸脫羧酶:鼠傷寒沙門菌陽性,普通變形桿菌陰性。
2 耐熱DNA 酶培養基
[用途]
用于檢測細菌所產生的耐熱脫氧核糖核酸酶。
[配法]
胰蛋白胨1.5g,植物蛋白胨0.5g,氯化鈉0.5g,DNA2g/ L ,瓊脂1.5g,蒸餾水100ml,2g/ L 甲苯胺藍溶液0.25ml。
將前6 種成分徐徐加熱溶解后,調pH 至7.4 ,加入甲苯胺藍溶液,分裝試管,121 ℃滅菌15min 后備用。
[用法]
上述瓊脂傾注于載玻片上,凝固后,打孔,孔徑2cm,孔內加入經100 ℃ 15min隔水加熱處理后的肉湯培養物。將載玻片孵育于35 ℃濕盒內4h ,取出觀察結果。陽性反應在孔周圍出現不小于4mm直徑粉紅色圈,陰性反應培養基的顏色無改變。
[質量控制]
金黃色葡萄球ATCC 25923 陽性;表皮葡萄球菌ATCC 12990 陰性。
3 DNA 酶試驗培養基
[用途]
供細菌DNA 酶測定用。
[ 配法]
DNA2g,胰酪胨15g,大豆胨5g,氯化鈉5g,瓊脂20g ,蒸餾水1L。
將5 種成分混合于蒸餾水中,加熱溶解,校正pH 至7.2-7.4 ,分裝三角燒瓶,經115 ℃滅菌15min,傾注滅菌平皿,4 ℃冷藏備用。
[用法]
將待檢菌作點狀穿種在平板上,置35 ℃培養24h 。待細菌生長成集落菌苔后,在其菌苔上及周圍滴加0.1mol/L 鹽酸溶液數毫升,待片刻后,如待檢菌DNA 酶陽性,可在菌苔的周圍出現明顯的透明圈;而陰性者則無透明圈出現。
[質量控制]
金黃色葡萄球菌ATCC 25923 和粘質沙雷菌ATCC 274 陽性;表皮葡萄球菌ATCC 14990 和大腸埃希菌ATCC 25922 陰性。
[保存] 置4 ℃冰箱1 周內用完。
4 氧化酶試驗
[用途]
區別假單胞菌與氧化酶陰性的腸桿菌科細菌。
[配法]
鹽酸二甲基對苯二胺(或四甲基對苯二胺)0.1g 加蒸餾水10ml。
[用法]
取白色潔凈濾紙一角,沾取試驗菌落少許,加試劑一滴。陽性者立即顯粉紅色,并于5-10s 內呈現深紫色反應。若用四甲基對苯二胺則陽性為藍色。
[質量控制]
銅綠假單胞菌ATCC 27853 陽性;大腸埃希菌ATCC 25922 陰性。
[保存]
置棕色瓶內可用一周,4 ℃冰箱保存,或分裝于棕色瓶內密封。
5 尿素酶試驗培養基
[用途]
用于細菌尿素酶測定
[配法]
蛋白胨1g,葡萄糖1g ,氯化鈉5g,磷酸二氫鉀2g ,4g/ L 酚紅溶液3ml,瓊脂18-20g, 200/L 尿素溶液100ml,蒸餾水1L 。
將前5 種成分混合于蒸餾水中,加熱溶解,校正pH 至7.0 ,然后加入酚紅溶液,分裝每瓶100ml,經121 ℃滅菌15min備用。臨用時,加熱溶解,冷卻至55 ℃左右,加入無菌的尿素溶液10ml,搖勻立即無菌分裝于滅菌試管,每支2 ml,并置成斜面。經無菌試驗后備用。
[用法]
取培養物接種斜面,35 ℃孵育24h 。尿素酶陽性者斜面變紅色,陰性者顏色無變化。
[質量控制]
普通變形桿菌ATCC 13315 (8h )整個培養基變紅、肺炎克雷伯菌ATCC 27236僅斜面變紅(24h ) ;大腸埃希菌ATCC 25922 為陰性(24h )。
[保存]
置4 ℃冰箱,2 周內用完
6 磷酸酶試驗培養基
[用途]
測定細菌產生磷酸酶的能力。用于區別葡萄球菌有無致病性,致病性葡萄球菌呈陽性。還有助于克雷伯菌屬與腸桿菌屬的鑒定。
[配法]
含磷酸酚酞的營養瓊脂培養基
將上述瓊脂加熱溶化,待冷卻至45 ℃時,加入濾過除菌的10g / L 磷酸酚酞溶液1 ml,搖勻后傾注平板。
[用法]
接種待測菌株,35 ℃培養18-24h 。在平皿蓋上滴加濃氨水1 滴,熏蒸片刻。如有酚酞釋出,菌落即變為粉紅色為陽性;不變色為陰性。
注:
(1)亦可用液體法進行試驗:經培養后在培養基內滴加氫氧化鈉溶液,觀察結果,顯紅色為陽性。
(2)以上為酸性磷酸酶的試驗方法。如果作堿性磷酸酶試驗,可將磷酸對硝基酚加入pH 10.5 、0.04mol/L 的甘氨酸氫氧化鈉緩沖液內。觀察結果時不必另行加堿。
(3)酚酞指示劑產生的顏色隨其pH 而變化,試劑的量要準確,太少或太多的堿均可引起假陽性或假陰性結果。