一、實驗原理
莢膜是細菌細胞壁外的一層粘液性多糖類物質,其對?染料的親和力較弱,因此不容易著色,通常采用負染色法染色,讓菌體和背景著色而莢膜不著色,從而使菌體周圍呈??現透明圈。由于莢膜本身含水量較多,質地疏松且單薄,因此在染色的時候不能加熱固定,以免莢膜受熱皺縮變形。莢膜染色可用于肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、炭疽芽孢桿菌以及產氣莢膜梭菌的鑒定。
二、試驗方法
1、制作適當厚度的細菌涂片,在空氣中自然干燥,不需要加熱固定。
2、滴加適量的A試劑于載玻片上,需將菌體完全覆蓋,染色5-7分鐘。
3、用B試劑沖洗涂片,沖洗要適度,2-3遍即可。
4、用吸水紙吸干,并立刻滴加1-2滴香柏油到涂片上,以防止結晶的形成。
5、由低倍鏡開始調節視野,最終在油鏡下觀察染色結果。
三、實驗結果
背景為藍紫色,菌體紫色,莢膜為無色或者淺紫色。如下圖所示:
四、注意事項
1、染色程度可通過改變染色時間做適當的調整。
2、脫色時不可用水沖洗,必須用B液。
3、不能加熱干燥固定涂片,以避免莢膜皺縮。
4、可多挑一些菌苔與水充分混合,并將粘稠的菌液盡量涂布均勻。
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