用途:用于結核桿菌的分離培養。
成分(g/ 600ml):
磷酸二氫鉀
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2.4
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硫酸鎂
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0.24
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檸檬酸鎂
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0.6
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L-谷氨酸鈉
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7.2
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孔雀綠
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0.4
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馬鈴薯淀粉
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30.0
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用法
稱取本品49.84g,并吸取甘油12ml,加熱攪拌溶解于 600ml蒸餾水中,煮沸5-10分鐘,121℃高壓滅菌15分鐘取出。待冷?至55℃左右時,以無菌操作加入無菌攪勻的全??蛋液1000ml,混勻 ( 避免產生氣泡 ),分裝18mm×180mm試管,每管7ml,置成長斜面 ,用 85-90℃流動蒸汽 1-1.5小時后,取出,放冷,備用。
注:培養基中含較多馬鈴薯淀粉,呈渾濁狀。
用法詳解:
(1)基礎培養基:稱取除全蛋液以外的?成分加熱煮沸溶解于600mL純化水中??,加熱過程需不停攪拌以防止馬鈴薯粉凝成塊或糊底,121℃滅菌15min,冷卻至55℃備用;
(2)全蛋液制備:將新鮮雞蛋洗刷外殼后,浸于5%碳酸鈉溶液中約30min,用清水沖洗后,浸泡于75%乙醇溶液中數分鐘,在無菌環境中用滅菌的鑷子或其他器具打破蛋殼,將蛋液倒入含玻璃珠的無菌錐形瓶中(可預先將玻璃珠放入錐形瓶中,121℃高壓蒸汽滅菌15-30min),??充分搖晃使蛋黃、蛋白搖散混合均勻。
注:新鮮雞蛋內的蛋液通常是無菌的,無須進行滅菌處理,操作過程應注意避免污染。若蛋液中可能殘存蛋殼碎渣,可將打散后的全蛋液用無菌紗布進行過濾。
(3)將1000mL全蛋液與600mL基礎溶液混合充分搖勻,無??菌分裝于滅菌的試管中,每管5-7mL(視試管的大小調整裝量),擺長斜面,用85-90℃流動蒸汽滅菌1-1.5h至斜面完全凝固,取出冷卻后備用。制備好的羅氏培養基斜面應呈微綠色或黃綠色。
注:不同于一般的培養基,此培養基中不使用瓊脂,而是通過蛋液的凝固效果制成固體培養基,因此硬度較低,且分枝桿菌生長周期長,為防止培養基過分失水變干,通常使用試管制成斜面使用而不是做成平板(平板通常培養3-5天后會有明顯失水變薄現象,而分枝桿菌通常需要培養數周的時間)。將蛋液與基礎培養基混合時,應緩慢倒入輕輕搖勻,防止產生過多氣泡。85-90℃的流動蒸汽可以保持蛋液中的維生素不被破壞,也可使用凝固器加溫至85-90℃,若無流動蒸汽滅菌器和凝固器,也可使用烘箱調節至85-90℃使培養基凝固。
改良羅氏培養基基礎(GB)微生物靈敏度試驗:
按標簽用法制備培養基,接種以下質控菌株,放置36±1℃需氧培養14-28天。
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