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羅氏培養基斜面管制備方法及注意事項

紀旭艷
錄入時間:2022-11-24 11:39:46 來源:青島龙8娱乐官方网站生物

一、用途及原理

  羅氏培養基常用于培養分枝桿菌,特別是用于結核分枝桿菌的分離培養及卡介苗的傳代和保存。??結核分枝桿菌為專性需氧菌,營養要求較高,能耐酸,最適生長pH為6.5-6.8,生長緩慢,必須在含血清、卵黃、馬鈴薯、甘油及某些無機鹽類的特殊培養基上才能生長。羅氏培養基中的全蛋液營養豐富,可促進分枝桿菌快速?生長,培養基中的孔雀綠可抑制部分雜菌的生長。


二、培養基配方

磷酸二氫鉀

2.4g

硫酸鎂

0.24g

檸檬酸鎂

0.6g

L-谷氨酸鈉

7.2g

孔雀綠

0.4g

馬鈴薯淀粉

30.0g

甘油

12mL

蒸餾水

600mL

全蛋液

1000mL

  注:由痰等標本中分離分枝桿菌時,若前處理方法為堿性物質,可將培養基中的磷酸??二氫鉀由2.4g增加至14g,即可制成酸性羅氏培養基;若?前處理方法為酸性物質,可將培養基中的2.4g磷酸二氫鉀改為3.6g磷酸氫二鉀,即可制成堿性羅氏培養基。


三、配制方法

  (1)基礎培養基:稱取除全蛋液以外的成分加熱煮沸溶解于600mL??純化水中,加熱過程需不停攪拌以防止馬鈴薯粉凝成塊或??糊底,121℃滅菌15min,冷卻至55℃備用;

  (2)全蛋液制備:將新鮮雞蛋洗刷外殼后,浸于5%碳酸鈉溶液中約30min??,用清水沖洗后,浸泡??于75%乙醇溶液中數分鐘,在無菌環境中用滅菌的鑷子或其他器具打破蛋殼,將蛋液倒入含玻璃珠的無菌錐形瓶中(可預先將玻璃珠放入錐形瓶中,121℃高壓蒸汽滅菌15-30min),充分搖晃使蛋黃、蛋白搖散混合均勻。

  注:新鮮雞蛋內的蛋液通常是無菌的,無須進行滅菌處理,操作過程應注意避免污染。若蛋液中可能殘存蛋殼碎渣,可將打散后的全蛋液用無菌紗布進行過濾。

  (3)將1000mL全蛋液與600mL基礎溶液混合充分搖勻,無菌分裝于滅菌的試管中,每管5-7mL(視試管?的大小調整裝量),擺長斜面,用??85-90℃流動蒸汽滅菌1-1.5h至斜面完全凝固,取出冷卻后備用。制備好的羅氏培養基斜面應呈微綠色或黃綠色。

  注:不同于一般的培養基,此培養基中不使用瓊脂,而是通過蛋液的凝固效果制成固體培養基,因此硬度較低,且分枝桿菌生長周期長,為防止培養基過分失水變干,通常使用試管制成斜面使用而不是做成平板(平板通常培養3-5天后會有明顯失水變薄現象,而分枝桿菌通常需要培養數周的時間)。將蛋液與基礎培養基混合時,應緩慢倒入輕輕搖勻,防止產生過多氣泡。85-90℃的流動蒸汽可以保持蛋液中的維生素不被破壞,也可使用凝固器加溫至85-90℃,若無流動蒸汽滅菌器和凝固器,也可使用烘箱調節至85-90℃使培養基凝固。


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注:本文屬龙8娱乐官方网站生物原創,未經允許不得轉載。


 

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