一、用途及原理
??蘇云金芽孢桿菌在形成芽孢的同時,會在芽孢旁邊生成一顆菱形、方形或不規則形狀的堿溶性蛋白晶體,稱為伴孢晶體。該晶體易被堿性染料著色,用堿性復紅染色后,可在顯微鏡下觀察到深紅色晶體。
??此現象為蘇云金芽孢桿菌的特征反應,在《GB4789.14-2014 蠟樣芽胞桿菌檢驗》中,該實驗為區分蠟樣芽胞桿菌和蘇云金芽孢桿菌的唯一方法。
二、成分
堿性復紅···············0.5g
乙醇·················20mL
蒸餾水················80mL
三、操作方法
?1、挑取純培養的單個可疑菌落接種于硫酸錳營養瓊脂平板上,30℃±1℃培養24 h±2 h, 并于室溫放置3 d~4 d;
2.挑取培養物少許于載玻片上,滴加蒸餾水混勻并涂成薄膜。經自然干燥,微火固定;
??3.加甲醇作用30 s后傾去,再通過火焰干燥,于載玻片上滴滿0.5%堿性復紅,放火焰上加熱(微見蒸氣,勿使染液沸騰)持續1 min~2 min,移去火焰,再更換染色液再次加溫染色30 s,傾去染液用潔凈自來水徹底清洗、晾干后鏡檢。
4.油鏡下觀察有無游離芽胞(淺紅色)和染成深紅色的菱形蛋白結晶體。
四、試驗結果
①形態的深紅色菱形或方形晶體為伴孢晶體
②形態的橢圓形或卵圓形物的為菌體芽孢,一般很難著色
③形態的紅色桿狀物為蘇云金芽孢桿菌菌體
注:如發現游離芽胞形成的不豐富,應再將培養物置室溫2d~3d后進行檢查。 除蘇云金芽胞桿菌外,其他芽胞桿菌不產生蛋白結晶體。
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