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賴氨酸鐵瓊脂(LIA)原理及現象

紀旭艷 林嬌嬌
錄入時間:2018-4-4 10:02:17 來源:青島龙8娱乐官方网站生物

一、用途

 用于同時檢測腸桿菌科細菌的賴氨酸脫羧酶和產硫化氫試驗,特別用于檢測沙門氏菌和亞利桑那菌


二、成分(g/L)及原理

    蛋白胨............................5.0
    葡萄糖............................1.0
    酵母浸粉..........................3.0
    L-賴氨酸鹽酸鹽..??............??......10.0
    硫代硫酸鈉........................0.04
    檸檬酸鐵銨........................0.5
    溴甲酚紫..........................0.02
    瓊脂..............................12.5
    pH6.7±0.2 at 25℃

 培養基中的蛋白胨和酵母浸粉提供基本營養物質,葡萄糖為唯一??可發酵碳源,硫代硫酸鈉可用于檢測硫化氫的生成,溴甲酚紫為酸堿指示劑。若細菌僅能發酵葡萄糖,則產酸使培養基變黃,斜面由于產酸較少被氧化生成堿性物質,底層不被氧化,因此斜面顯紫色底層顯黃色。有些細菌具有賴氨酸脫??羧酶,使賴氨酸脫羧產堿,底層又變成紫色。有些細菌可還原硫代硫酸鈉產生硫化氫,并與檸檬酸鐵銨反應生成黑色沉淀。


三、試驗方法

 ??; 1、稱取本品32.0g,加熱攪拌溶解于1000mL蒸餾水中,分裝試管,121℃高壓滅菌15min,冷至60℃左右時,制成斜面。

  2、將質控菌株劃線后穿刺接種到培養基上。

  3、放置于35±1℃恒溫培養箱中需氧培養24±2小時。


四、結果觀察

  接種以下質控菌株,放置于35±1℃恒溫培養箱中需氧培養24±2小時。

質控菌株

菌株編號

生長情況

其它特征

亞利桑那沙門氏菌

CMCC(B) 47001

+++

斜面紫色,底層紫色,產硫化氫

鼠傷寒沙門氏菌

ATCC 14028

+++

斜面紫色,底層紫色,產硫化氫

大腸埃希氏菌

ATCC 25922

+++

斜面紫色,底層紫色,不產硫化氫


圖1 賴氨酸鐵瓊脂(LIA)培養基微生物質控結果


五、與三糖鐵瓊脂(TSI)對比

 三糖鐵瓊脂(TSI)和賴氨酸鐵瓊脂(LIA)均用于沙門氏菌的檢測。TSI中除葡萄糖,還含有乳糖和蔗糖,絕大多數沙門氏菌不發酵乳糖和蔗糖,產硫化氫,因而在TSI上呈斜面紅色,底層黃色,有黑色沉淀。而亞利桑那沙門氏菌中部分菌株可以發酵乳糖,在TSI上呈現出斜面黃色,底層黃色,產硫化氫,這一現象與普通變形桿菌相同(普通變形桿菌發酵蔗糖不發酵乳糖,產硫化氫)。奇異變形桿菌(發酵葡萄糖,不發酵乳糖和蔗糖,產硫化氫)在TSI上呈斜面紅色,底層黃色,并有黑色沉淀,與多數沙門氏菌現象一致。因此,在TSI上很難將變形桿??菌與沙門氏菌區分開。在LIA上,多數沙門氏菌(包括亞利桑那沙門氏菌)由于賴氨酸脫羧酶陽性,產硫化氫,因而表現出斜面紫色、底層紫色,底層有黑色沉淀。而變形桿菌不能將賴氨酸脫羧產堿,因而表現出斜面紫色,底層黃色,底層有黑色沉淀。與TSI相比,LIA能將沙門氏菌與變形桿菌區分開來,特別是有利于亞利桑那沙門氏菌的檢測。

圖2 LIA與TSI斜面上沙門氏菌和變形桿菌的對比


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注:本文屬龙8娱乐官方网站生物原創,未經允許不得轉載。

 

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