一、用途
用于同時檢測腸桿菌科細菌的賴氨酸脫羧酶和產硫化氫試驗,特別用于檢測沙門氏菌和亞利桑那菌。
二、成分(g/L)及原理
蛋白胨............................5.0
葡萄糖............................1.0
酵母浸粉..........................3.0
L-賴氨酸鹽酸鹽..??............??......10.0
硫代硫酸鈉........................0.04
檸檬酸鐵銨........................0.5
溴甲酚紫..........................0.02
瓊脂..............................12.5
pH6.7±0.2 at 25℃
培養基中的蛋白胨和酵母浸粉提供基本營養物質,葡萄糖為唯一??可發酵碳源,硫代硫酸鈉可用于檢測硫化氫的生成,溴甲酚紫為酸堿指示劑。若細菌僅能發酵葡萄糖,則產酸使培養基變黃,斜面由于產酸較少被氧化生成堿性物質,底層不被氧化,因此斜面顯紫色底層顯黃色。有些細菌具有賴氨酸脫??羧酶,使賴氨酸脫羧產堿,底層又變成紫色。有些細菌可還原硫代硫酸鈉產生硫化氫,并與檸檬酸鐵銨反應生成黑色沉淀。
三、試驗方法
 ??; 1、稱取本品32.0g,加熱攪拌溶解于1000mL蒸餾水中,分裝試管,121℃高壓滅菌15min,冷至60℃左右時,制成斜面。
2、將質控菌株劃線后穿刺接種到培養基上。
3、放置于35±1℃恒溫培養箱中需氧培養24±2小時。
四、結果觀察
接種以下質控菌株,放置于35±1℃恒溫培養箱中需氧培養24±2小時。
質控菌株 |
菌株編號 |
生長情況 |
其它特征 |
亞利桑那沙門氏菌 |
CMCC(B) 47001 |
+++ |
斜面紫色,底層紫色,產硫化氫 |
鼠傷寒沙門氏菌 |
ATCC 14028 |
+++ |
斜面紫色,底層紫色,產硫化氫 |
大腸埃希氏菌 |
ATCC 25922 |
+++ |
斜面紫色,底層紫色,不產硫化氫 |
圖1 賴氨酸鐵瓊脂(LIA)培養基微生物質控結果
五、與三糖鐵瓊脂(TSI)對比
三糖鐵瓊脂(TSI)和賴氨酸鐵瓊脂(LIA)均用于沙門氏菌的檢測。TSI中除葡萄糖,還含有乳糖和蔗糖,絕大多數沙門氏菌不發酵乳糖和蔗糖,產硫化氫,因而在TSI上呈斜面紅色,底層黃色,有黑色沉淀。而亞利桑那沙門氏菌中部分菌株可以發酵乳糖,在TSI上呈現出斜面黃色,底層黃色,產硫化氫,這一現象與普通變形桿菌相同(普通變形桿菌發酵蔗糖不發酵乳糖,產硫化氫)。奇異變形桿菌(發酵葡萄糖,不發酵乳糖和蔗糖,產硫化氫)在TSI上呈斜面紅色,底層黃色,并有黑色沉淀,與多數沙門氏菌現象一致。因此,在TSI上很難將變形桿??菌與沙門氏菌區分開。在LIA上,多數沙門氏菌(包括亞利桑那沙門氏菌)由于賴氨酸脫羧酶陽性,產硫化氫,因而表現出斜面紫色、底層紫色,底層有黑色沉淀。而變形桿菌不能將賴氨酸脫羧產堿,因而表現出斜面紫色,底層黃色,底層有黑色沉淀。與TSI相比,LIA能將沙門氏菌與變形桿菌區分開來,特別是有利于亞利桑那沙門氏菌的檢測。
圖2 LIA與TSI斜面上沙門氏菌和變形桿菌的對比
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