一、試驗原理：

   伊紅美蘭培養基（簡稱E?MB?? medium）主要用于大腸桿菌和產氣腸桿菌的分離和鑒別。

   其配方中各主要成分的作用為：蛋白胨提供碳源和氮源；乳糖是大腸菌群發酵的糖類；磷酸氫二鉀是緩沖劑；瓊脂是培養基凝??固劑；伊紅（Eosin Y）也稱曙紅或四溴熒光素，為酸性染料，美蘭（eosin-methylene blue），也叫亞甲藍（C16H18N3S·Cl），為堿性染料，二者在培養基中均為指示劑。

   當大腸桿菌分解乳糖產酸時，細菌帶正電，所以染上紅色，再與美蘭結合而形成紫黑色菌落，并帶有金屬光澤；產氣腸桿菌則呈棕色，很少有金屬光澤。不分解?乳糖的細菌，如沙門氏菌和志賀氏菌，則為無色或琥珀色半透明菌落；凝固酶陽性葡萄球菌為無色針尖大小的菌落；白色念珠菌則為蛛絲狀或羽毛狀菌落?。

   因該培養基抑制作用較弱，不宜用于腸道致病菌的分離。有資料稱往該培養基中加入鹽酸金霉素，可以抑制大部分雜菌，以用于臨床尿、大便、??口腔和陰道分泌物，指甲或皮膚屑中白色念珠菌的快速鑒定。還有報道稱，本培養基可用于檢查凝固酶陽?性葡萄球菌，其結果與凝固酶試驗相一致。

二、試驗操作方法

   用美藍培養基鑒定水中，步驟如下:

   ①制作美藍培養基，趁熱注入中，凝成平板，待用。

   ②用高溫滅菌的錐形瓶盛取河水或溝水，按1:10稀釋。

   ③取0.1毫升接種于美藍培養基上。用進行分離。

   ④將劃線后的培養皿倒置37℃溫箱中培養18~24小時。培養基中會出現，中心呈暗藍黑色，發金屬光澤。

   ⑤將菌落接種于上（由營養瓊脂培養基制成）。

三、常見問題

   問：GB/T 5750.12-2006標準中說大腸菌群?初發酵陽性后，“將產酸產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上”，怎么轉種到伊紅美藍瓊脂平板上啊？是先配好伊紅美藍傾倒在培養皿上，待瓊脂凝固后，劃線接種，還是先吸取1mL的發酵液注入到培養皿上，再傾倒15-20mL的瓊脂，待凝固后倒置培養，就像食品中菌落總數檢測方法那樣?呢？

   答：就是先?配好伊紅美藍傾倒在培養皿上，待瓊脂凝固后，劃線接種，這樣可以看到典型菌落形態；然后找一些典型或可疑菌落做下一步驗??證實驗就可以了。

   問： 那劃線接種所用的工具是接種環還是別的東西？以前沒實踐過平??板劃線這個?實驗，所以不太了解。另外標準上說的菌落總數培養基是營養瓊脂，用的和正常檢測食品的PCA計數平板是一個東西嗎？

   答：接種用的是接種環。菌落總數用的營養瓊脂和檢測食品的PCA差不多，但PCA的營養成分還要高一些。

   問：我實驗條件有限，沒有乳糖和伊紅。乳糖能否用蔗?糖代替？伊紅能否用紅墨水干了后的東西代替（我看見某?網站上說紅墨水用的是伊紅）？

   答：常用的伊紅美藍乳糖培養基，可用來鑒別飲用水和乳制品中是否存在大腸桿菌等細菌。如果有大腸桿菌，因其強烈分解乳糖而產生大量的混合酸，菌體帶H+，故菌落被染成深紫色，從菌落表面的反射光中還可以看到金屬光澤。乳糖是一個半乳糖和一個葡萄糖構成，蔗糖是一個果糖和一個葡萄糖形成的。所以乳糖是必須的，因為牽涉??到細菌產酸底物的特異性。

   另外你用紅墨水，不?怕里面的某些成分把細菌殺死嗎？并且墨水不一定是伊紅配成的，而且墨水成分也不僅僅是伊紅，如果你自行代替，至??少我是不會承認你的實驗結果是有效的，因為你都說不清楚培養基里到底有什么。

   問：培養基里的磷酸鹽是干嘛的？不加可以嗎？

&nb?sp;  答：磷酸氫鹽是作為pH緩沖劑添加的，如果培養時間不長的話，不加也無妨。培養時間長的話，大腸桿菌等細菌分解乳糖產酸導致pH下降，會抑制不耐酸細菌的生長。

   問：請問在做大腸菌群的檢測過程中，在配制伊紅美蘭瓊脂培養基時，乳糖、伊??紅和美蘭溶液要滅菌嗎？

   答：需要滅菌。

   問：顯色培養基，個人覺?得還是買成品好！現在發現自己比較難配，而且試劑店的這種冷門試劑很多都是長時間存放的，難免變質，再說個人每次用量太少，買一盒試劑又貴又用不完。要是有成品的這種培養基就好了！不?知道哪里有賣的？能不能給推薦一下？

   答：現在很多生物試劑都有成品，自己根本不用配。就拿EMB培養基來說吧，龙8娱乐官方网站青島龙8娱乐官方网站生物計數公司就有好幾個產品類型，有干粉、顆粒、甚至還有直接可以拿來用的倒好的無菌平板，都是針對不同用戶需求專門制作的。

   問：該產品可靠嗎？質量怎么保證？

   答：成品培養基出廠前都是經過質量檢測的。您要不放心也可以再自己做一下。

   問：能詳細介紹一下你們的EMB瓊脂平板這款產品嗎？

   答：

  【產品名稱】伊紅美藍平板

  【規格】90mm

  【用途】供作腸道致病菌及大腸菌群的分離培養

  【使用步驟】
   1、復溫：取出培養基復溫至室溫；
   2、接種：將需要接種的預稀釋好的標本或菌株用無菌移液管吸取一定量后??移至平板，然后慢慢釋放，釋放的同時將移液管作“Z”字形移動，或采用劃線、涂布、其它常用方法接種??????????????????????????于培養基皆可；
   3、培養：將接種好的培養基作好標識，置于35±2℃恒溫培養箱中培?養24～48h后取出，觀察結果。
  【預期結果】

   根?據菌落形態，做出相應的處理或報告??。據檢驗目的不同，挑取無色菌落或挑選引線紅色及有金屬光澤的菌落轉種到克氏雙糖或三糖鐵瓊脂進行鑒定。
  【注意事項】
   1、檢查平板內是否干裂或染菌，如上面有菌請勿使用；
   2、請在潔凈的環境下操作，避免雜菌干擾；
 &nb?sp; 3、培養時培養基平板應倒置于培養箱中，?避免接觸培養箱壁和底部以致培養基過熱干縮；
   4、拆封后未使用完的培養基要及時放到冰箱冷藏儲存，避免干裂；
   5、在冰箱儲存很久的培養基容易出現??一些冷凝水，?請在潔凈的環境下將水倒出，然后在培養箱放置一段時間，待其表面干燥后再接種；
   6、棄物處理：使用后應高壓滅菌或焚燒后方可按一般垃圾處理，也可按專業技術人員指示方法處??理。
  【貯藏】2～8℃,避光儲存，拆封后及時放入冰箱冷藏
  【有效期】3個月
  【生產日期及批號】見標簽或外包裝

   問：這個方便多了，反正用的量也不是太多的！再問一個??問題，為什么要把水樣和融化的培養基混?合？不會使菌落數偏少嗎？

   答：待測液是應該和培養基混合，俗稱混平板法。當然，你選擇涂平板也沒有問題。混平板法會??殺死不耐熱的??細菌，平板法會對細菌造成機械損傷，各有利弊。

&nbs??p;  個人經驗是一個9cm平板倒入培養基后吹干表面的水??，加入500ul水樣反復傾斜平板使得水樣涂遍培養基，然后吹干即可。

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