結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)培養基為選擇性計數固體培養基,主要用于大腸菌群平板計數檢驗。該培養基的配制及使用方法為:稱取本品 41.5g,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,煮沸不要超過2 分鐘。取適宜稀釋度樣品液 1ml,加入到無菌平皿中心,將冷至 45℃ ± 0.5℃ 的 VRBA 10-15ml傾注于平皿中。小心旋轉平?皿將培養基與樣液充分混勻。凝固后,再加3-4ml VRBA 覆蓋平板表層 ,翻轉平板,置于36 ± 1℃培養&nbs??p;18-24 小時。無需高壓滅菌。臨用時制備,不得超過3小時。
VRBA的使用方法與其他培養基的不同之處在于:1、無需高壓滅菌,煮沸不超過2分鐘,必須現?用現配。2、該培?養基在傾注第一層凝固之后需要再用VRBA覆蓋一層,然后再進行培養。
為什么每個平板上均?要傾倒兩次結晶紫中性紅膽鹽培養基?主要是為了防止表面有遷徙性細菌生長,因為一旦有遷徙性菌落生長蔓延,那這塊平板就很難能夠清楚的計數了。再倒一次瓊脂把可能存在的遷徙性菌落封在瓊脂內,讓其不能蔓延開來,這樣就不會對結果觀察造成影響了。所以再次傾倒可以防止菌落蔓延導致無法計數的現象發生。
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