1、方法

《醫藥工業潔凈室（區）沉降菌的測試方法》（GB/T16294-2010）

沉降法：通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養基平皿中，經若干時間，在??適宜的條件下使其繁殖到可見菌落并進行計數，以平板培養皿中的?菌落數來判定潔凈環境內的活微生物數，并以此評定潔凈室（區）的潔凈度。

2、沉降皿

沉降皿：直徑90mm*15mm

培養基：大豆酪蛋白瓊脂（TSA）

        沙氏瓊脂（SDA）

培養條件：同浮游菌監測

培養基質量：

  應符合2015年版《中國藥典》中“（1921）藥品微生物實驗室質量管理指導原則”的相關要求。

1）培養基制備要求

2）培養基貯藏要求

3）培養基的質量控制試驗

  用于環境監控的培養基須特別防護，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養基，那么在使用前應進行100%的預培養以防止外來的污染物帶到環境中及避免出現假陽性結果。

關鍵問題：暴露蒸發失水，會降低培養基的某些微生物的生長。

  單向氣流暴露4小時，TSA版失重16%

  為了延長暴露??和培養基的時間，同時確保平皿仍然提供可靠的結果，沉降皿可以澆注到一個特定??的高澆注線。

包裝：通常是雙重或三重包裝，這取決于潔凈室的級別。最外層包裝進入下一個最高級別的潔凈室中之后被移除。對于A級（ISO5級）潔凈室和隔離器，三層透明包裝時最合適的。

隔離器的沉降皿：最內層的包裝材料必須是過氧化氫蒸汽不可滲透的，以確保這種常用的消毒劑不會轉移的培養基上，采樣后抑制微生物生長，最好使用為隔??離器設計的培養基。

3、監測

1）人員的清潔、消毒和著裝

2）在溫度、濕度、壓力的測試之后進行

3）明確測試狀態，靜態測試人員不得多于2人，一般應動態監測

4）開啟凈化空調系統

單向流、靜態10min以上，非單向流30min以上

5）最少采樣點數

注：A級（單向流）面積指送風口表面積；任何小的潔凈區采樣點不得少于2個。

6）采樣位置：

離地面0.8-1.5m左右，高于工作面

關鍵設備或關鍵區域，可增加采樣點

7）采樣次數：每個點1次

8）采樣時間：靜態30分鐘；動態4小時

   單碟暴露時間可以少于4小時，同一位置可使用對個沉降碟連續進行監測并累積計數。

9）最少培養皿數：

4、注意事項

1）采取一切措施防止采樣污染和其他人為對樣本的污染。

2）采樣注意事項：同懸浮粒子監測

3）培養基質量

4）陰性對照試驗  每次或每個區域取1個對照培養皿

5）日常監測：A級區及無菌隔離系統采樣點數目應不小于3個且每個采樣點的平皿數應不小于1個。

5、結果判斷：

每個測點的沉降菌平均濃度必須低于所選定評定標準中的界限。

在靜態測試時，若某測點的沉降游菌??的平均濃度超過評定標準，應重新采樣兩次，兩次測?試結果均合格才能判為符合。

6、限度的理解：A級＜1cfu/碟

   舉例：監測了左中右3個位置，1碟/位置

不合格結果：3個沉降碟平均菌落數≥1cfu

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