1.方法提要

&?nbsp;  ??;本標準采用的的方法是計數濃度法，即通過收集懸浮在空氣中的生物性粒子于專門的培養基（選擇能證實其能夠支持微生物生長的培養基），經若干時間和適宜的生長條件讓其繁殖到可見的菌落計數，以判定該潔凈室的微生物濃度。

2.人員的職責及培訓

   潔凈室（區）的測試人員應進行本專業的培訓并獲得相應資格后才能履行對潔凈室（區）測試的??職責，其中包含涉及的衛生知識和基本微生?物知識。

   潔凈室（區）的測試人員應選擇與生產操作的空氣潔凈度級別要求相適應的穿戴方式，外面的衣服不能帶進100000級以上的區域。

3.儀器、輔助設備和培養基

   選擇合適的浮??游菌采樣器，包括采用無油的抽氣泵，較低的氣流流速和較大的采樣流量，以保證培養基表面的水分不被吹干。

   本測試需要具備儀器、輔助設備和培養基如下：

   a)浮游菌采樣器；

   b)培養皿；

   c)培養基（大豆酪蛋白瓊脂培養基、沙氏瓊脂培養基）

   d)恒溫培養箱；

   e)高壓蒸汽滅菌器。

4.浮游菌采樣器原理

   浮游菌采樣器一般采用撞擊法原理，可分為狹縫式采樣器、離心式或針孔式采樣器。狹縫式采樣器由內部風機將氣流吸入，通過采樣器的狹縫式平板，將采集的空氣噴射并撞擊到緩慢旋轉的平板培養基表面上，附著的活微生物粒子經培養后形成菌落。離心式采樣器由于內部風機的高速旋轉，氣流從采樣器前部吸入從后部流出，在離心力的作用下，空氣中的活微生物的粒子有足夠的時間撞擊到專用的固形培養基條上，附著的活微生物粒子經培養后形成菌落。針孔式采樣器是氣流通過一個金屬蓋吸入，蓋子上是密集的經過機械加工的特質小孔，通過風機將收集的細小的?空氣流直接撞擊到平板培養基表面上，附著的活微生物粒子經培養后形成菌落。

5測試要點

5.1必須按照測試儀器的檢定周期，定期對儀器作檢定。使用校驗合格，且在使用有效期內的儀器。

5.2測試儀器在未進入被?測區域時，若必需，則先清潔表面，或在相應的??潔凈室內準備和存放（用保護罩或其他適當地外罩保護儀器）。

5.3在100級潔凈室內用紙時，上面應蒙上一張透明不沾塵的覆蓋物，在100級潔凈室內不能用鉛筆盒橡皮。

5.4使用測試儀器時應嚴格按照儀器說明書操作。

5.4.1儀器開機，預熱至穩定后，方可按儀?器說明書的規定對儀器進行校正，同時檢查采樣流量，并根據采樣量設定采樣時??間。

5.4.2采樣口必須用便于消毒及化學性能穩定的材料制造。

5.4.3采樣管嚴禁滲漏，內壁應光滑。

5.4.4采樣管的長度應根據測點的高度定，盡量減少彎曲。

6培養皿

6.1一般采用90mm×15mm規格的培養皿。可根據所選用采樣器選擇合適的培養皿。

6.2離心式采樣器采用專用的固形培養條。

7培養基

   大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA）或沙氏培養基（SDA）或其他用戶認可并經驗證了的培養基。其配制方法見附錄B。

8恒溫培養箱

   必須定期對恒溫培養箱進行校驗。

9測試步驟

9.1測試前儀器、培養皿表面必須嚴格消毒。

9.1.1采樣器進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用于100級潔凈室的采樣器宜預先放在被測房間內。

9.1.2用消毒劑擦凈培養皿的外表面。

9.1.3采樣前，先用消毒劑清洗采樣器的頂蓋、轉盤以及罩子的內外面，采樣結束，再用消毒??劑輕輕噴射罩子的內壁和轉盤??。

9.1.4采樣口?及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如果消毒劑對采樣管的外壁及內壁進行消毒時，應將管中的殘留液倒掉晾干。

9.1.5采樣者應穿戴與被測潔凈區域相應的工作服，在轉盤上放入或調換培養皿前，雙手用消毒劑消毒或??戴無菌手套操作。

9.1.6采樣儀器經消毒后先不放入培養皿，開啟浮游菌采樣器，使儀器中的殘余消毒劑蒸發，時間不少于5min，并檢查流量并根據采樣量調整設定采樣時間。

9.1.7關閉浮游菌采樣器，放入培養皿，蓋上蓋子。

9.1.8置采樣口于采樣點后，開啟浮游菌采樣器進行采樣。

10培養

10.1全部采樣結束后，將培養皿倒置于恒溫培養箱中培養。

10.2采用大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA）配制的培養皿經采樣后，在30℃~35℃培養箱中培養，時間不少于2d；采用沙氏培養基（SDA）配制的培養皿經采樣后，在20℃~25℃培養箱中培養，時間不少于5d。

10.3每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否污染。可每批選定3只培養皿作對照培養。

11菌落計數

11.1用肉眼對培養皿上所有的菌落直接計數，標記或在菌落計數器上點計，然后用5~10倍放大鏡檢查，有否遺漏。

11.2若平板上右2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數。

12注意事項

12.1使用前應仔細檢查每個培養皿的質量，培養基及培養皿有變質、破損或污染的不能使用。

12.2對培養基、培養條件及其他參數做詳細的記錄。

12.3由于細菌種類繁多，差別甚大，計數時一般用透射光于培養皿背面或正面仔細觀??察，不要漏計培養皿??邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落或培養基沉淀物的區別，必要時用顯微鏡鑒別。

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