培養基的使用
1 瓊脂培養基的融化
??將培養基放到沸水浴中或采用有相同效果的方法(如高壓鍋中的層流蒸汽)使之融化。經過高壓的培養基應盡量減少重新加熱時間,融化后避免過度加熱。融化后應短暫置于室溫中(如2 min)以避免玻璃瓶破碎。
融化后的培養基放入47℃~50℃的恒溫水浴鍋中冷卻保溫(可根據實際培養基凝固溫度適當提高水浴鍋溫度),直至使用,培養基達到47℃~50℃的時間與培養基的品種、體積、數量有關。融化后的培養基應盡快使用,放置時間一般不應超過4 h?。未用完的培養基不能重新凝固留待下次使用。敏感的培養基尤應注意,融化后保溫時間應盡量縮短,如有特定要求可參考指定的標準。
傾注到樣品中的培養基溫度應控制在約45℃左右。
2 培養基的脫氧
必要時,將培養基在使用前放到沸水浴或蒸汽浴中加熱15 min;加熱時松開容器的蓋子;加熱后蓋緊,并迅速冷卻至使用溫度(如FT培養基)。
3 添加成分的加入
對熱不穩定的添加成分應在培養基冷卻至47℃~50??℃時再加入。無菌的添加成分在加入前應先放置到室溫,避免冷的液體造成瓊脂凝結或形成片狀物。將加入添加成分的培養基緩慢充分混勻,盡快分裝到待用的容器中。
4 平板的制備和儲存
傾注融化的培養基到平皿中,使之在平皿中形成厚度至少為3 mm(直徑90 mm的平皿,通常要加入18 mL~20 mL瓊脂培養基)。將平皿蓋好皿蓋后放到水平平面使瓊脂冷卻凝固。如果平板需儲存,或者培養時間超過48 h或培養溫度高于40 ℃,則需要傾注更多的培養基。凝固后的培養基應立即使用或存放于暗處和(或)5 ℃±3 ?℃冰箱的密封袋中,以防止培養基成分的改變。在平板底部或側邊做好標記,標記的內容包括名稱、制備日期和(或)有效期。也可使用適宜的培養基編碼系統進行標記。
?將倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延長儲存期限。為了避免冷凝水的產生,平板應冷卻后再裝入袋中。儲存前不要對培養基表面進行干燥處理。
?對于采用表面接種形式培養的固體培養基,應先對瓊脂表面進行干燥:揭開平皿蓋,將平板倒扣于烘箱或培養箱中(溫度設為25 ℃~50 ??℃);或放在有對流的無菌凈化臺中,直到培養基表面的水滴消失為止。注意不要過度干燥。商品化的平板瓊脂培養基應按照廠商提供的說明使用。
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