一、實驗目的和內容
目的：學會檢測微生物與氧關系的方法，了解微生物與氧的關系。
內容：通過調整轉速和瓶裝量檢測微生物生長與氧氣的關系。
二、實驗材料和用具
大腸桿菌斜面菌種、牛肉膏蛋白胨培養基。
吸量管、三角瓶、恒溫振蕩器、721分光光度計、比色杯等。
三、操作步驟
(一)LB培養基的制備
1．配制牛肉膏蛋白胨培養基。
2．分裝   取4個300mL三角瓶，每瓶裝入50 mL培養基，編號為1、2、3、4；另取4個500mL三角瓶，每瓶分別裝入50mL、l00mL、150mL和200mL培養基，編號為5、6、7、8。再取一個100mL三角瓶，裝入20mL培養基，剩余的培養基裝入到兩個500mL三角瓶中，所有三角瓶均用8層紗布和線繩包扎。
3．滅菌   將上述分裝的培養基于121C濕熱滅菌30min，冷卻后備用。
(二)供試菌種的制備
l．菌種活化   將冰箱中儲藏的大腸桿菌斜面菌種轉接至牛肉膏蛋白胨斜面培養基上，37℃培養18~20h備用。
2．種子制備   取上述活化的大腸桿菌一環接人盛有20mL牛肉膏蛋白胨培養基的100mL三角瓶中，37℃，200r/min搖床培養16～18h作為供試種子。
(三)不同轉速對大腸桿菌生長的影響
取1~4號三角瓶，每瓶接入lmL上述大腸桿菌種子，1號靜置于溫箱中，2號置75r/min搖床，3號置于150r/min搖床，4號置于225r/min搖床，在37℃下培養12~16h后取出，搖勻，經適當稀釋后，測定每個瓶中的OD值(λ=600nm)，并同時以原培養基不接種作對照測定。記錄結果于表17-1中。
(四)不同瓶裝量對大腸桿菌生長的影響
取上述5~8號三角瓶，按1%的接種量接人上述大腸桿菌種子，37C,200r/min培養12~16h后一并取出，用721分光光度計測定OD值(λ=600m)，如密度太大可作適當稀釋后再測OD值，記錄實驗結果于表17-2中。
四、注意事項
1．接種前要將種子充分搖勻，接種時要保證接種量一致。嚴格無菌操作，以免污染。
2．測定OD值時要搖勻后再取培養液。若經稀釋后測定，則各瓶培養物的稀釋倍數要一致。
五、實驗報告
1．將測定結果列于表17-1和表17-2中：
表17-1  不同轉數對大腸桿菌生長量的影響
表17-2  不同瓶裝量對大腸桿菌生長量的影響
2．繪制曲線分別以轉速或瓶裝量為橫坐標，以OD值為縱坐標繪制大腸桿菌生長與氧關系的曲線。
3．試對以上曲線進行分析。
六、問題和思考
1．根據微生物與氧的關系，可將微生物分為哪幾大類？
2．專性厭氧微生物為什么在有氧的條件下不能生長？
3．試設計一實驗，如何測定酵母菌或放紅菌及霉菌與氧的關系。
   
   

 

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