形態
挑取純培養的單個菌落,?作革蘭氏染色鏡檢。蠟樣芽胞桿菌為革蘭氏陽性芽胞大桿菌,大小為(1~1.3)μm×(3~5)μm,芽胞呈橢圓形位于菌體中央或偏端,不膨大于菌體,菌體兩端較平整,多呈短鏈或長鏈狀排列。
生化鑒定
挑取純培養的單個菌落,進行酪蛋白分解試驗、動力試驗、V-P試驗、硝酸鹽還原試驗、糖發酵試驗、溶菌酶耐性試驗。
根狀生長試驗
挑取單個可疑菌落劃線接種于營養瓊脂平板上,30 ℃±1 ℃培養24 h±2 h。蕈狀芽胞桿菌形成根狀生長的特征。多數蠟樣芽胞桿菌菌株形成粗糙的似毛玻璃狀或融蠟狀的菌落。
溶血試驗
挑取純培養的單個可疑菌落接種于TSSB瓊脂平板上,30 ℃±1 ℃培養24 h±2 h。蠟樣芽胞桿菌菌落為淺灰色,不透明,似白色毛玻璃狀,有草綠色溶血環或完全溶血環。蘇?云金芽胞桿菌和蕈狀芽胞桿菌呈現弱的溶血現象,而多數炭疽芽胞桿菌為不溶血,巨大芽胞桿菌??為不溶血。
蛋白質毒素結晶試驗
取經30 ℃±1 ℃培養24 h±2 h并于室溫放置3 d~4 d的營養瓊脂培養物少許于載玻片上,滴加蒸餾水混勻并涂成薄膜。經自然干燥,微火固定后,加甲醇作用30 s后傾去,再通過火焰干燥,于載玻片上滴滿0.5%堿性復紅,放火焰上加熱(微見蒸氣,勿使染液沸騰)持續1 min~2 min,移去火焰,再更換染色液再次加溫染色30 s,傾去染液用潔凈自來水徹底清洗、晾干后鏡檢。
觀察有無游離芽胞(淺紅色)和染成深紅色的菱形、正方形或其它形狀的蛋白結晶體。如發現游?離芽胞形成的不豐富,應將培養物置室?溫2 d~3 d再行檢查。放置3d~4d以上的蘇云金芽胞桿菌培養物有大量的結晶體,但是只有在芽胞裂?解通過上述染色方法才能見到。然而,除非見到芽胞,否則培養物應在室溫繼續放置幾天以重新檢查毒素晶體。其它芽胞桿菌不產生蛋白質毒素晶體。
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