目的

學習并掌握觀察毛霉和根霉形態特征的基本方法。

原理

毛霉和根霉都屬于真菌的接合?菌門。它們是空氣中最常見的污染菌。菌落生長迅速，表面呈棉花樣，初為白色，以后變灰至褐灰色。菌絲單細胞無橫隔，有分枝，多核。毛霉無假根；根霉有假根和匍匐絲。無性生殖產生孢囊孢子。孢囊梗直接由菌絲體上長出，孢囊梗頂端膨?大形成孢囊，孢囊成熟破裂后，露出囊軸，囊軸基部與孢囊梗連接處稱為囊托。毛霉無囊托，根霉的假根上方產生孢囊梗。孢囊孢子呈球形、卵形或不規則形。有性生殖形成接合孢子，常為異宗配合即由“+”“－”型菌絲接合形成。這些結構均可通過制水壓片在低倍鏡下進行觀察。

很多青霉、曲霉及鐮刀菌尚未發現它們的有性生殖階段，常稱為半知菌。 即只知其生活周期的一半。目前已發現有些菌的有性階段屬于?子囊菌或擔子菌。這三種菌的無性生殖階段均有特征性的分生孢子梗及分生孢子形態和分生孢子著生方式。它們多是腐生菌，廣泛分布于土壤、空氣、水果和糧食中。青霉菌落多為灰綠色，菌落質地絨狀、絮狀、繩狀或束狀，成熟后表面呈粉末狀。青霉菌絲可直接分化形成分生孢子梗，其頂端具有對稱或不對稱的掃帚狀分枝，其上著生幾輪小梗，小梗頂端著生成串的球狀或卵狀的綠色分生孢子。曲霉菌落呈絨毛狀或絮狀，表面有同心圓形的輪狀帶。分生孢子梗長在厚壁的足細胞上，不分枝，頂端膨大成球?形、橢圓形或棍棒狀頂囊。其表面著生一層或兩層小梗，下層為柱狀初生小梗，上層為瓶狀次生小梗，頂端著生成串的球狀分生孢子。鐮刀菌菌落呈絨毛狀，多為白色、粉紅色或紫紅色。菌絲分隔有分枝。具有兩種分生孢子，小型分生孢子梗分枝或不分枝，其頂端有鏈狀或假頭狀著生的小型分生孢子。大型分生孢子梗不分枝，其頂端著生鐮刀狀大型分生孢子，多隔，單生或叢生。

載片培養法是研究絲狀真菌生長繁殖全過的有效方法。即將菌絲體接種在載玻片上的小塊培養基薄??片上，加蓋蓋玻片，使絲狀真菌只能在載玻片和蓋玻片的狹窄空間內橫向生長，因而可觀察到孢子萌發、菌絲生長及孢子形成的各生長階段，且不會因觀察而污染標本片。

材料

1．菌種：毛霉（Mucor）“+”、“－”型菌株

根霉（Rhizopus）

青霉（Penicillium sp.）

曲霉（Aspergillus sp.）

鐮刀菌（Fusarium sp.）

2．浮載劑：乳酸酚溶液。

3．培養基：真菌培養基。

4．其它：無菌培養皿，載玻片，蓋玻片，無菌水，擦鏡紙，吸水紙及接種鉤。

方法

1．形態觀察

（1）直接觀察：不打開培養皿蓋，將培養皿置于載物臺上，在低倍鏡下直接觀察毛霉和根霉的各部分結構。

（2）制水壓片：取一潔凈載玻片，于中央滴1 滴乳酸酚溶液，用接種針挑取少許菌絲及孢囊于染液中，用兩根接種針將其拉松散?，再輕輕蓋上蓋玻片。注意：千萬不要有氣泡！置于高倍鏡下進行觀察。

2．毛霉接合孢子觀察

（1）培養：分別在已倒好馬鈴薯葡萄糖培養基的平皿背面中央劃一條線，于線左右分別標“－”“+”， 然后取相應的毛霉菌株接種，并在26℃ 恒溫箱中倒置培養7 天。

（2）鏡檢：在低倍鏡下沿劃線處尋找接合孢子，在顯微鏡下直接觀察，或制成水壓片進行觀察。

3．載片培養法觀察菌體形態結構

（1）準備材料：在培養皿內放1 張圓形濾紙片，1 個U 型架，1 片載玻片和2 片蓋玻片，滅菌后備用；

（2）制薄層培養基：取一平底無菌培養皿，向內倒入約5ml 已融化馬鈴薯葡萄糖培養基，迅速搖勻使成薄層。凝固后，用無菌解剖刀割為1cm2 小塊；

（3）制片：在無菌操作下，向U 型棒支撐的載玻片上移入2 小塊培養基，在中央分別接種青霉、曲霉和鐮刀菌，蓋好蓋玻片輕壓??勿留氣泡。然后用無菌滴管向圓濾紙片上滴加滅菌的20% 甘油，至濾紙完全濕潤為止；

（4）培養：26℃~28℃培養3 天后開始觀察。

4．菌落形態觀察

   制備查氏培養基平板，在平板中央分別接種青霉、曲霉及鐮刀菌，26℃~28℃下恒溫培養5 天后，觀察并比較菌落形態。

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