一、目的
學習并掌握細菌芽孢染色的方法及原理。
二、原理
??細菌的芽孢具有一層結構構致密的芽孢壁,通透性差、著色較難,用普通染色法染色菌體著色而芽孢呈現不染色的輪廓,但特殊處理(加熱染色或腐蝕性藥物處理)色素即可,透過芽孢壁使芽孢著色,一經著色便不易褪色,脫色時只能脫掉菌體的顏色而保留芽孢的顏色。因此,如再換另一種顏色的染液復染菌體,便會使菌體和芽孢呈不同顏色的鮮明對照。
三、材料
1.菌種 枯草芽孢桿菌。
??2.儀器及其他 顯微鏡,接種環、酒精燈、載玻片、7.6%的孔雀綠染色液、 0.5%的蕃紅、石炭酸復紅、美藍、吸水紙、枯草芽孢桿菌、水浴鍋或小燒杯與三角架。
四、方法與步驟
1.孔雀綠蕃紅芽孢染色法
?(1)涂片經火焰固定,滴定孔雀綠染液于涂片上,加熱至產生蒸汽達3~5min (加熱時要慢慢來回移動,添加染液勿使涂片干燥)。
(2)水洗后,再用蕃紅染液復染1-2min。
(3)水洗、干燥、鏡檢、繪圖。芽孢被染上綠色,營養體呈紅色。
2.石炭酸復紅染色法
(1)試管一支.加蒸餾水3〜4滴,取1〜2環芽抱桿菌于水中,并充分搖蕩制成均勻的懸浮液。
(2)滴加等量3〜4滴石炭酸復紅液搖勻,水浴煮沸10min以上。
(3)取上述加熱后的染色菌懸液2〜3環于載玻片上制成涂片,然后經過干燥、火焰固定、水洗。
(4)美藍復染3~4min,經水洗、干燥后,鏡檢,繪圖。
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