1.復活菌株
選擇合適的培養基和培養條件(根據生產商說明)進行復活。凍干菌株的傳代次數不得超過5代,從菌種保藏中心購買的凍干菌種為第0代。
(1)細菌
用無菌吸管吸0.5ml 液體培養基加到凍干菌塊上,吹打混勻成懸液,將全部懸液移入含有5ml合適的肉湯培養基中。將管中殘留的幾滴懸液移種到斜面上。在合適的條件下培養,細菌培養溫度通常為25℃或37℃。多數凍干菌株會在幾天后長出,但是少數菌會表現出延滯期延長的現象,需要將正常培養時間加倍。
(2)噬菌體
首先應準備18h〜24h的宿主細菌培養物,往凍干噬菌體中加1.0ml肉湯(視宿主細菌而定)混勻,吸0.1ml懸液到0.9ml肉湯中,依次系列稀釋。每個稀釋度的稀釋液一滴接種到預先準備好的平板上,每平板采用3個〜4個稀釋度。過夜培養后可出現噬菌斑。
(3)霉菌和酵母菌
用無菌吸管吸0.5 ml〜1ml無菌水到凍干菌塊上,將全部內容物移入裝有5 ml,無菌水的試管中進行復水,2 h(或過夜)后移種到肉湯或固體瓊脂上,在合適的溫度下培養,真菌培養溫度通常是25℃。少數培養物會表現出延滯期延長的現象,需要將正常培養時間加倍。
如菌株在推薦的培養基、培養溫度和時間等適宜的條件下培養不生長,須滅菌處理之后方可丟棄。
2.菌種純度檢査和確認
(1)菌落形態
取復活后的培養物,在相應的鑒別平板或普通非選擇性平板上劃線分離,培養??出單菌落,觀察菌落形態是否符合,同一??平板上的單菌落的大小、形狀、顏色、質地、光澤等是否相似;對于出現兩種或以上形態的菌株,應再分別挑取單菌落劃線或稀釋涂布培養,檢測是否重復出現相同特征。
(2)細胞形態
對數生長期的培養物的革蘭氏染色反應應呈現一致性;細胞形狀、大小、鞭毛、莢膜等特征應相似。
(3)芽孢大小、位置、形狀
形成芽孢的菌種,其芽孢大小、位置、形狀應相似。
(4)生化鑒定
必要時進行生化鑒定等實驗。
(5)污染處理
如發現菌種有污染,需要分離挑選目標菌株培養成功后將污染培養物做滅菌處理。
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