一、實驗目的和內容
目的：了解細菌鞭毛染色的原理，掌握鞭毛染色法；學習觀察細菌運動的方法。
內容：1. 細菌的鞭毛染色法。
2．用壓滴法觀察細菌的運動。
3．用懸滴法觀察細菌的運動。
二、實驗材料和用具
普通變形菌(Proteus vulgaris)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。
牛肉膏蛋白胨培養基斜面、鞭毛染色液、0.01%美藍水溶液、香柏油、二甲苯、無菌水、凡士林；顯微鏡、擦鏡紙、接種環、酒精燈、載玻片、凹載玻片、蓋玻片、鑷子、細玻棒、吸水紙。
三、操作步驟
(一)細菌鞭毛染色
1．活化菌種  將保存的變形菌在新制備的普通牛肉膏蛋白胨斜面培養基上連續移種2～3次，每次于30℃培養10～15h。活化后菌種備用。
2．制片  在干凈載玻片的一端滴一滴蒸餾水，用無菌操作法，以接種環從活化菌種中取少許菌苔(注意不要帶培養基)，在載玻片的水滴中輕沾幾下。將載玻片稍傾斜，使菌液隨水滴緩緩流到另一端，然后平放，于空氣中干燥。
3．染色
(1)滴加鞭毛染色液A液，染3～5min。
(2)用蒸餾水充分洗凈A液，使背景清潔。
(3)將殘水瀝干或用B液沖去殘水。
(4)滴加B液，在微火上加熱使微冒蒸汽，并隨時補充染料以免干涸，染30～60S。
(5)待冷卻后，用蒸餾水輕輕沖洗干凈，自然干燥或濾紙吸干。
  4．鏡檢  先用低倍鏡和高倍鏡找到典型區域，然后用油鏡觀察。菌體為深褐色，鞭毛為褐色。注意觀察鞭毛著生位置(鏡檢時應多找幾個視野，有時只在部分涂片上染出鞭毛)。
(二)細菌運動的觀察
1．壓滴法
(1)制備菌液：從幼齡菌斜面上，挑數環菌放在裝有1～2mL無菌水的試管中，制成輕度混濁的菌懸液。
(2)取2～3環稀釋菌液于潔凈載玻片中央，再加入一環0.01%的美藍水溶液，混勻。
(3)用鑷子夾一潔凈的蓋玻片，先使其一邊接觸菌液，然后慢慢地放下蓋玻片，這樣可防止產生氣泡。
(4)鏡檢：將光線適當調暗，先用低倍鏡找到觀察部位，再用高倍鏡觀察。要區分細菌鞭毛運動和布朗運動，后者只是在原處左右擺動，細菌細胞間有明顯位移者，才能判定為有運動性。
2．懸滴法
(1)取潔凈蓋玻片，在四周涂少許凡士林。
(2)在蓋玻片中央滴一小滴菌液（圖9—1A）
(3)將凹玻片的凹窩向下，使凹窩中心對準蓋玻片中央的菌液(圖9-1B)，輕輕地蓋在蓋玻片上，便凹玻片與蓋玻片粘在一起(注意液滴不得與凹玻片接觸)。
(4)小心將玻片翻轉過來，使菌液正好懸在窩的中央。再用火柴棒輕壓蓋玻片四周使封閉，以防菌液干燥。
（5）鏡檢：將光線適當調暗，先用低倍鏡找到懸滴的邊緣后(圖9—1D)，再將菌液移至視野中央，換用高倍鏡觀察，注意細菌是如何運動的，它與分子布朗運動的不同。
四、注意事項
1．鞭毛染色液最好當日配置當日用，次日使用則鞭毛染色淺，觀察效果差。染色時一定要充分洗凈A液后再加B液，否則背景不清晰。
2．觀察細菌的運動，載玻片和蓋玻片都要潔凈無油，否則會影響細菌的運動。有些細菌，溫度太低時不能運動。
五、實驗報告
1．繪出你所觀察到的細菌的形態及鞭毛著生情況。
2．試描述你所觀察的細菌有無運動性，是如何運動的?
六、問題和思考
1．鞭毛染色的菌種為什么要先連續傳幾代，并且要采用幼齡菌種?
2．根據你的實驗體會，哪些因素影響鞭毛染色的效果?如何控制?
3．試設計一實驗，如何鑒別某種細菌是否能運動，是否有鞭毛，其鞭毛的著生位置。
  
   

 

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