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4、儀器和試劑
4．1 儀器
實驗室常用設備、低?溫高速離心機、低溫冰箱(-80℃)或液氮罐、生物安全柜、恒溫培養箱、恒溫水
浴、滅菌設備、勻漿器等。
4．2試劑
4.2.1 營養肉湯培養基
&?nbsp; 牛肉膏 &nbs??p; 2.5 g
胰蛋白胨 ??; 5.0 g
&n?bsp; 氯化鈉 2.5 g
磷酸氫二鉀 ?1．3?? g
加蒸餾水至500 mL，加熱溶解，調?pH至7.4，分裝后0.103 MPa滅菌20 min，4℃保存備用，保存
期不超過半年。
4.2.2 營養肉湯瓊脂培養基
瓊脂粉 1.5 g
加營養肉湯培養基至100 mL，加熱融化后調節pH為7.4，0.103 MP?a滅菌20 min。
4.2.3 底層培養基
4.2.3.1 配制方法
?在400mL滅菌的1.5％瓊脂培養基??(100℃)中依次加入磷酸鹽貯備液8 mL，40％葡萄糖溶液
20mL，充分混勻，冷??卻至80℃左右時按每?平皿25 mL(相對于90 mm平皿)制備平板，冷凝固化后倒
置于37℃培養箱中24 h，備用。
4.2.3.2 磷酸鹽貯備??液(Vogel—Bonner minimal medium E，50倍)
磷酸氫鈉銨 17．????5 g
檸檬酸 ?? ? 10．0 g
?? 磷酸氫二鉀 50．0 g
硫酸鎂 ?? 1．O g
加蒸餾水至1?00 mL溶解，0.103 MPa滅菌20 min。
注：待其他試劑完全溶解后冉將硫酸鎂緩慢放人其中繼??續溶解，否則容易析出沉淀。
4.2.3.2 40％葡萄糖溶液
葡萄糖4??0．0 g加蒸餾水至100 mI．，O．055 MPa滅菌??20 min。
4.2.3.4 1.5％瓊脂培養基
瓊脂粉6.0加入400 mL??錐形瓶，加蒸餾水至400 mL，融化后，0.103 MPa滅菌20 min。
4.2.4 頂層培養基
加熱融化頂層瓊脂，每100 mL頂層瓊脂中加10 mL?組氨酸生物素溶液(0.5 mmol／L)。混勻，分
裝在4個燒瓶中，0.103 MPa滅菌20 mi?n。用時融化分裝小試管，每管2 mL，45℃水浴中保溫。頂層
瓊脂和組氨酸生物素溶液(0.5mmol／L)配制如下。
4.2.4.1 頂層瓊脂
&nbs??p; 瓊脂粉3.0 g，氯化鈉2.5g加蒸餾水至500 mI。，0.103 MPa滅菌20 min。
4.2.4.2 組氨酸一生物素溶液(0.5mmol／L)(誘變試驗用)
D-生??物素(相對分子質量244)30．5 mg和L-組氨酸(相對分子質量155)19．4 mg加蒸餾水?至
250 mL，0.103 MPa滅菌20 min。
4.2.5特殊試劑及培養基
4.2.5.1 0.8％氨芐青霉素溶液(鑒定菌株用，無菌配制)
&nbs??p; 氨芐青霉素40 mg用氫氧化鈉溶液(0.02 mo1／?L)稀釋至5 mL，保存4℃冰箱備用。
4.2.5.2 0.1％結晶紫溶液(鑒定菌株用)
100 mg結晶紫，溶于無菌水至100 mL。
4.2.5.3 L-組氨酸溶液和D-生物素溶液(0.5mmol／L)(鑒定菌株用)
&nbs?p; &nbs??p; L-組氨酸0.4043 g和D-生物素12．2 mg分別溶于蒸餾水至100 mL，0.103 MPa滅菌20 min，保存
于4℃冰箱備用。
4.2.5.4 0.8％四環素溶液(用于四環素抗性試驗和氨芐青霉素四環素平板)
40 mg四環素用鹽酸緩沖液(0.02?? mol／L)稀釋至5 mL，??保存于4℃冰箱。
4.?2.5.5 氨芐青霉素平板(用作TA97、TA98、TAl00菌株的主平板)和氨芐青霉素四環素平板(用作
TAl02菌株的主平板)
每1000 mL由以下成分組成：
底層培養基 980 mL
組氨酸水溶液(0.4043 ?g／100 mL) 10 mL
生物素(0.5mmol／L) 6 ?mL
0.8％氨芐青霉素溶液 &??nbsp; 3.15 ?mL
&n?bsp; 0.8％四環素溶液 0.25 mL
&nb?sp; 四環素僅在使用對四環素有抗性的TAl02時加入。各成分均已分別滅菌或無菌制備。
4.2.5.6組氨酸-生物素平板(組氨酸需要試驗用)
每1000 mL中由以下成分組成：
底層培養基 984 mL
? 組氨酸水溶液(0.4043 g／100 mL) 10 mL
生物素(0.5 mmol／L) 6 mL
各成分均已分別滅菌。
4.2.5.7二甲亞砜(DMSO)
光譜純，無菌。
