5.1 樣品處理

5.1.1 一般樣品

取25g（mL)樣品（水果、蔬??菜、水產品為50g）加??入盛有225mL Bolton肉湯的有濾網的均質袋中（若為無濾網均質袋可使用無菌紗布過濾），用拍擊式均質器均質1min～2min，經濾網或無菌紗布過濾，將濾過液進行培養。

5.1.2 整禽等樣品

用200mL0.1%的蛋白胨水中充分沖洗樣品的內外部，并振蕩2min～3min，經無菌紗布過濾至250mL離心管中，16000g離心15 min后棄去上清，用10 mL 0.1%蛋白胨水懸浮沉淀，吸取3 mL于1???00 mLBolton肉湯中進行培養。

5.1.3 貝類

??取至少12個帶殼樣品，除去外殼后將所有內容物放到均質袋中，用拍擊式均質器均質1min～2min，取25g樣品至225 mLBolton肉湯中（1:10稀釋），充分震蕩后再轉移25mL于225 mLBolton肉湯中（1:100稀釋??），將1:10和1:100稀釋的Bolton肉湯同時進行培養。

5.1.4 蛋黃液或蛋漿

取25 g（mL)樣品于125mLBolton?肉湯中并混勻（1:6稀釋），再轉移25mL于100mLBolton肉湯中并混勻（1:30稀釋），同時將1:6和1:30稀釋的Bolton肉湯進行培養。

5.1.5 鮮乳、冰淇淋、奶酪等

若為液體乳制品取50g；若為固體乳制品取50g加入盛有50mL0.1%蛋白胨??水的有濾網均質袋中，用拍擊式均質器均質15s～30 s，保留過濾液。必要時調整pH值至7.5±0.2，將液體乳制品或濾過液以20000g 離心30 min后棄去上清，用10 mL Bolton肉湯懸浮??沉淀（盡量避免帶入油層），再轉移至90 mLBolton肉湯進行培養。

5.1.6 需表面涂拭檢測的樣品

無菌棉簽擦拭檢測樣品的表面（面積至少100?? cm2以上），將棉簽頭剪落到100 mLBolton肉湯中進行培養。

5.1.7 水樣

將4 L 的水（對于氯處理的水，在過濾前每升水中加入5 mL1mol/L硫代硫酸鈉溶液）經0.45 μ??m濾膜過濾，把濾膜浸沒在100 mL? Bolton肉湯中進行培養。

5.2 預增菌與增菌

在微需氧條件下，36 ℃±1 ℃培養4 h，如條件允許配以100 r/min的速度進行振蕩。必??要時測定增菌液的pH值?并調整至7.4±0.2，42 ℃±1 ℃繼續培養24 h～48 h。

5.3 分離

將24 h增菌液、48 h增菌液及對應的1??:50稀釋液分別劃線接種于Skirr?ow血瓊脂與mCCDA瓊脂平板上，微需氧條件下42 ℃±1 ℃培養24 h～48 h。另外可選擇使用空腸彎曲菌顯色平板作為補充。

觀察24 h培養與48 h培養的瓊脂平板上的菌??落形態，mCCDA瓊脂平板上的可疑菌落通常為淡灰色，有金屬光澤、潮濕、扁平，呈擴散生長的傾向。Skirrow血瓊脂平板上的第一型可疑菌落為灰色、扁平、濕潤有光澤，呈沿接種線向外擴散的傾向；第二型可疑菌落常呈分散凸起的單個菌落，邊緣整齊、發亮。空腸彎曲菌顯色培養基上的可疑菌落按照說明進行判定。

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