一、實驗目的和內容
目的：學習和掌握配制培養基的一般方法和步驟。
內容：1．牛肉膏蛋白陳培養基的配制。
2．高氏1號培養基的配制。
3．馬丁氏培養基的配制。
二、實驗材料和用具
  牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉紅、鏈霉素、1mol/L NaOH、lmol/L HCl、KNO3、NaCl、K2HPO4•3H2O、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O。
試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH試紙、棉花、牛皮紙、記號筆、線繩、紗布、漏斗、漏斗架、膠管、止水夾等。
三、操作步驟
（一）牛肉膏蛋白胨培養基的配制
牛肉膏蛋白胨培養基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養基。其配方如下：
牛肉膏3g，蛋白胨10g，Nacl5g，瓊脂15～20g，水1000mL，PH7.4～7.6
    1．稱藥品 　按實際用量計算后，按配方稱取各種藥品放入大燒杯中。牛肉膏可放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶解后倒入大燒杯；也可放在稱量紙上稱量，隨后放入熱水中，牛肉膏使與稱量紙分離，立即取出紙片。蛋白胨極易吸潮，故稱量時要迅速。
2．加熱溶解  在燒杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉網上，小火加熱，并用玻棒攪拌，待藥品完全溶解后再補充水分至所需量。若配制固體培養基，則將稱好的瓊脂放入己溶解的藥品中，再加熱融化，此過程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底或溢出，最后補足所失的水分。
3． 調pH   檢測培養基的pH，若pH偏酸，可滴加lmol/L NaOH，邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙檢測，直至達到所需pH范圍。若偏堿，則用lmol/L HCl進行調節。pH的調節通常放在加瓊脂之前。應注意pH值不要調過頭，以免回調而影響培養基內各離子的濃度。
4．過濾   液體培養基可用濾紙過濾，固體培養基可用4層紗布趁熱過濾，以利培養的觀察。但是供一般使用的培養基，這步可省略。
5．分裝   按實驗要求，可將配制的培養基分裝入試管或三角瓶內。分裝時可用漏斗以免使培養基沾在管口或瓶口上而造成污染。
分裝量：固體培養基約為試管高度的l/5，滅菌后制成斜面。分裝入三角瓶內以不超過其容積的一半為宜。半固體培養基以試管高度的1/3為宜，滅菌后垂直待凝。
6．加棉塞   試管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脫脂棉)制作的棉塞。棉塞的形狀、大小和松緊度要合適，四周緊貼管壁，不留縫隙，才能起到防止雜菌侵入和有利通氣的作用。要使棉塞總長約3/5塞入試管口或瓶口內，以防棉塞脫落。有些微生物需要更好的通氣，則可用8層紗布制成通氣塞。有時也可用試管帽或塑料塞代替棉塞。
7．包扎   加塞后，將三角瓶的棉塞外包一層牛皮紙或雙層報紙，以防滅菌時冷凝水沾濕棉塞。若培養基分裝于試管中，則應以5支或7支在一起，再于棉塞外包一層牛皮紙，用繩扎好。然后用記號筆注明、培養基名稱、組別、日期。
8．滅菌   將上述培養基于121.3℃濕熱滅菌20min。如因特殊情況不能及時滅菌，則應故人冰箱內暫存。
9．擺斜面  滅菌后，如制斜面，則需趁熱將試管口端擱在一根長木條上，并調整斜度，便斜面的長度不超過試管總長的1/2。
10．無菌檢查 將滅菌的培養基放入37℃溫箱中培養24～48h，無菌生長即可使用，或貯存于冰箱或清潔的櫥內，備用。
（二）高氏l號培養基的配制
高氏1號培養基是用于分離和培養放線菌的合成培養基。其配方如下：
可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g，K2HPO4•3H2O 0.5g，MgSO4•7H2O 0.5g，FeSO4•7H2O 0.01g，瓊脂15～20g，水1000mL，pH7.4～7.6。 
l．稱量和溶解   先計算后稱量，按用量先稱取可溶性淀粉，放入小燒杯中，并用少量冷水將其調成糊狀，再加至少于所需水量的水，繼續加熱，邊加熱邊攪拌，至其完全溶解。再加入其他成分依次溶解。對微量成分FeSO4•7H2O可先配成高濃度的貯備液后再加入，方法是先在1000mL中加入1g的FeSO4•7H2O，配成濃度為0.01g/mL的貯備液，再在1000mL培養基中加入以上貯備液1mL即可。待所有藥品完全溶解后，補充水分到所需的總體積。如要配制固體培養基，其瓊脂溶解過程同牛肉膏蛋白胨培養基配制。
2．pH調節、分裝、包扎及無菌檢查  同牛肉膏蛋白胨培養基配制。
（三）馬丁氏培養基的配制
馬丁氏培養基是用于分離真菌的選擇培養基。其配方如下：
K2HPO4 1g，MgSO4•7H2O 0.5g，蛋白胨5g，葡萄糖l0g，瓊脂15～20g，水1000mL，自然pH。
1．稱量和溶解  先計算后稱量，按用量稱取各成分，并將其溶解在少于所需的水中。待各成分完全溶解后，補充水分到所需體積。再將孟加拉紅配成1%的水溶液，在1000mL培養液中加入以上孟加拉紅溶液3.3mL，混勻后，加入瓊脂加熱融化，方法同牛肉膏蛋白胨培養基配制。
2．分裝、包扎、滅菌及無菌檢查同牛肉膏蛋白膝培養基配制。
  3．鏈霉素的加入  鏈霉素受熱容易分解，所以臨用時，將培養基融化后待溫度降至45℃左右時才能加入。可先將鏈霉素配成1%的溶液(配好的鏈霉素溶液保存于-20℃)，在100mL培養基中加1%鏈霉素0.3mL ，使每毫升培養基中合鏈霉素30μg。
四、注意事項
    稱藥品用的牛角匙不要混用，稱完藥品應及時蓋緊瓶蓋。調pH時要小心操作，避免回調。不同培養基各有配制特點，要注意具體操作。
五、實驗報告
記錄本實驗配制培養基的名稱、數量，并圖解說明其配制過程，指明要點。
六、問題和思考
l．配制培養基有哪幾個步驟?在操作過程中應注意些什么問題?為什么?
2．培養基配制完成后，為什么必須立即滅菌?若不能及時滅菌應如何處理?已滅菌的培養基如何進行無菌檢查?
    3．試設計實驗對飲料進行無菌檢查。
 
   

 

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