增菌
以無菌操作取檢樣25g(mL)加入到含有225mL mEC+n肉湯的均質袋中,在拍擊式均??質器上連續均質1~2 min。于36±1℃培養18~24h。同時做陽性?及陰性對照。
無菌操作,陰陽行對照避免交叉污染。
10??00mL增菌培養基中加1mL新生霉素儲備液?,使最終濃度為20mg/L。
分離
?? 取增菌后或篩選試驗陽性的mEC+n肉湯,分別劃線或適當稀釋后取0.1mL涂布接種于CT-SMAC平板和改良CHROMagar O157顯色瓊脂平板上,于36±1℃培養?18~24h,觀察菌落。必要時將混合菌落分純。在CT-SMAC平板上,發酵山梨醇的菌落為紅色;典型菌落為不發酵山梨醇的圓形、光滑、較小的無色菌落,中心呈現較暗的灰褐色,用接種針挑起時無拉絲現象。在改良CHROMagar O157顯色瓊脂平板上為圓形、較小的菌落,中心呈淡紫色-紫紅色,邊緣無色或淺灰色。
取100??0ml滅菌融化并冷卻至45℃??±1℃的山梨醇麥康凱(SMAC)瓊脂, 加入1 ml亞碲酸鉀溶液和10mL頭孢克肟溶液,混勻后傾注平板。
亞碲酸鉀最終濃度達到2.5mg/L,頭孢克肟最終濃度達到0.05mg/L。
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