用1 mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1.0 mL,沿管壁緩慢注于裝有9 mL0.85%生??理鹽水的無菌試管中(注意吸管尖端不要觸及稀?釋液),振搖試管或換用1支無菌吸管反復吹打使其混合均勻,制成1:100的樣品勻液。
另取1 mL無菌吸管或微量移液器吸頭,按上述操作順序,做10倍遞增樣品勻液,如此每遞增稀釋一次,即換用??1次1 mL滅菌吸管或吸頭。
根據食品衛生標準要求或對檢樣污染情況的估計,選擇三個連續的適宜稀釋度,每個稀釋度吸取0.1 mL稀釋液于MRS瓊脂平板或MC瓊脂平板進行表面涂布,每個稀釋度作兩個平皿。MC瓊脂平板用于嗜熱鏈球菌的計數。含雙歧桿菌的樣品需絕對厭氧,置36 ℃±1 ℃恒溫箱內培養48 h±2 h,不含雙歧桿菌的樣品需兼性厭氧,置36?? ℃±1 ℃恒溫箱內培養48 h±2 h,培養后選取菌落數在30~300之間的平板進行計數。乳酸菌在MRS和MC培養基上菌落生長形態特征。
?? 挑取3個或以上的可疑菌落,嗜熱鏈球菌接種于MC瓊脂平板,乳桿菌屬和雙歧桿菌屬接種于MRS瓊脂平板,雙歧桿菌需絕對厭氧,置36 ℃±1 ℃恒溫箱內培養48 h±2 h,不含雙歧桿菌需兼性厭氧,置36 ℃±1℃恒溫箱內培養48 h±2 h。
鑒定
涂片鏡檢:乳桿菌屬細胞形態多樣,從長的桿狀和細長桿狀到彎曲桿狀及短桿狀,一般形成鏈。通常不運動。無芽胞,革蘭氏染色陽性。嗜熱鏈球菌形態為球形或球桿狀,直徑為0.5 μm~2.0 μm,細胞成對或成鏈排列,無芽胞,革蘭氏染色陽性。雙歧桿菌屬細胞呈多樣形態,有較規則短桿狀或纖細桿狀具有尖細末段的細胞,也有呈球形??者,可形成各種分支或分叉形。無芽胞,革蘭氏染色陽性。
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