一、 滅菌緩沖液                                                      
    磷酸鹽緩沖液(pH6.0) 取磷酸氫二鉀2g與磷酸二氫鉀8g，加水使成1000ml，濾過，
在115℃滅菌30分鐘。
    磷酸鹽緩沖液(pH7.8) 取磷酸氫二鉀5.59g與磷酸二氫鉀0.41g，加水使成1000ml，
濾過，在115℃滅菌30分鐘。     
    磷酸鹽緩沖液(pH10.5) 取磷酸氫二鉀35g，加10mol/L氫氧化鉀溶液2ml，加水使成
1000ml，濾過，在115℃滅菌30分鐘。        
二、菌懸液的制備                                                    
    枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）懸液  取枯草芽孢桿菌［CMCC（B） 63501］
的營養瓊脂斜面培養物，接種于盛有營養瓊脂培養基的培養瓶中，在35～37℃培養7日,
用革蘭氏染色法涂片鏡檢，應有芽孢85％以上。用滅菌水將芽孢洗下，在65℃加熱30分
鐘，備用。
    短小芽孢桿菌（Bacillus pumilus）懸液　取短小芽孢桿菌［CMCC（B）63202］的
營養瓊脂斜面培養物，照上述方法制備。                                        
    金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）懸液  取金黃色葡萄球菌［CMCC（B）
26003］的營養瓊脂斜面培養物,接種于營養瓊脂斜面上，在35～37℃培養20～22小時。
臨用時，用滅菌水或0.9％滅菌氯化鈉溶液將菌苔洗下，備用。
    藤黃微球菌（Micrococcus luteus）懸液  取藤黃微球菌［CMCC（B）28001］的營
養瓊脂斜面培養物，接種于盛有營養瓊脂培養基的培養瓶中，在26～27℃培養24小時，
或采用適當方法制備的菌斜面,用培養基Ⅲ或0.9％滅菌氯化鈉溶液將菌苔洗下，備用。
    大腸桿菌（Escherichia coli）懸液  取大腸桿菌［CMCC（B）44103］的營養瓊脂
斜面培養物，接種于營養瓊脂斜面上，在35～37℃培養20～22小時。臨用時，用滅菌水
將菌苔洗下，備用。                                                              
    啤酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）懸液  取啤酒酵母菌（9763）的Ｖ號培
養基瓊脂斜面培養物，接種于Ⅳ號培養基瓊脂斜面上。在32～35℃培養24小時，用滅菌
水將菌苔洗下置含有滅菌玻璃珠的試管中，振搖均勻，備用。
    
 三、標準品溶液的制備  標準品的使用和保存，應照標準品說明書的規定。臨用時照表
1的規定進行稀釋。                                          
 四、供試品溶液的制備  精密稱（或量）取供試品適量，用各藥品項下規定的溶劑溶解
后，再按估計效價或標示量照表1的規定稀釋至與標準品相當的濃度。        
    
五、雙碟的制備  取直徑約90mm、高16～17mm的平底雙碟，分別注入加熱融化的培養基
（照表 1）20ml，使在碟底內均勻攤布，放置水平臺上使凝固，作為底層。另取培養基
適量加熱融化后，放冷至48～50℃（芽孢可至60℃），加入規定的試驗菌懸液適量（能
得清晰的抑菌圈為度。二劑量法標準品溶液的高濃度所致的抑菌圈直徑在18～22mm，三
劑量法標準品溶液的中心濃度所致的抑菌圈直徑在15～18mm），搖勻,在每1雙碟中分別
加入5ml，使在底層上均勻攤布，作為菌層。放置水平臺上冷卻后，在每1雙碟中以等距
離均勻安置不銹鋼小管（內徑6.0±0.1mm，高10.0±0.1mm，外徑7.8±0.1mm）4個（二
劑量法）或6個（三劑量法），用陶瓦圓蓋覆蓋備用。     

 

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