(2) 沙門氏菌(Salmonella species)  取營養肉湯培養基3份，每份各100ml,2份分
別加入規定量的供試液，其中1份加入對照菌液作陽性對照，第3份加入與供試液等量的
稀釋劑作空白對照。培養18～24小時，空白對照應無菌生長。取其余2份培養液各1ml，
分別接種于四硫磺酸鈉亮綠培養基10ml中，培養18～24小時。分別劃線接種于膽鹽硫乳
瓊脂（或沙門氏、志賀氏菌屬瓊脂）培養基和麥康凱瓊脂（或曙紅亞甲藍瓊脂）培養基
的平板上，培養18～24小時或延至40～48小時。當陽性對照的平板呈現陽性菌落時，供
試品的平板無菌落生長，或有菌落但不同于表2所列特征時，可判為未檢出沙門氏菌。
    如供試品平板生長的菌落特征有與表2所列菌落形態特征相符或疑似者，均應挑選2
～3個菌落分別接種于三糖鐵瓊脂培養斜面上，陽性對照同時接種,培養18～24小時后，
陽性對照的斜面應為紅色，底層為黃色，硫化氫陽性，而供試品疑似菌斜面未見紅色、
底層未見黃色，可判為未檢出沙門氏菌。否則，應繼續做革蘭氏染色、生化試驗、動力
檢查與血清凝集試驗。
             表2   沙門氏菌菌落形態特征
───────┬────────────────────────────
 　培 養 基 　│                   菌  落  形  態
───────┼────────────────────────────
膽鹽硫乳瓊脂　│無色至淺橙色，半透明，菌落中心帶黑色或全部黑色或無黑色。
───────┼────────────────────────────
沙門氏、志賀　│無色至淡紅色，半透明或不透明，菌落中心有時帶黑褐色。
氏菌屬瓊脂　  │
───────┼────────────────────────────
曙紅亞甲藍瓊脂│無色至淺橙色，透明或半透明，光滑濕潤的圓形菌落。
───────┼────────────────────────────
麥康凱瓊脂 　 │無色至淺橙色，透明或半透明，菌落中心有時為暗色。
───────┴────────────────────────────
    革蘭氏染色  照大腸桿菌項下方法操作，鏡檢。
    靛基質試驗  照大腸桿菌項下操作并判斷結果。
    尿素酶試驗  取疑似菌斜面培養物接種于尿素瓊脂培養基斜面上，培養24小時，斜
面變為紅色為陽性，不變色為陰性。
    氰化鉀試驗   取培養20～24小時的疑似菌株營養肉湯培養液，分別用白金耳沾取1
環，接種至對照培養基及氰化鉀培養基內，立即以橡膠塞塞緊，培養24～48小時，對照
管應有菌生長，試驗管有菌生長者為陽性，無菌生長為陰性。
    賴氨酸脫羧酶試驗  取疑似菌斜面培養物分別接種賴氨酸脫羧酶培養基及對照培養
基上。培養24～48小時，對照管應為黃色，試驗管呈紫色為陽性，呈黃色為陰性。
    動力檢查  取疑似菌斜面培養物穿刺接種于半固體營養瓊脂培養基管中，培養24小
時，細菌沿穿刺線外周擴散生長，為動力陽性，否則為陰性。陰性培養物，應在室溫保
留2～3天后，再判斷。
    血清凝集試驗  在潔凈載玻片一端，以白金耳沾取沙門氏菌屬A～F“0” 多價血清
2～3環，再取斜面上部的培養物少許，與血清混合，將玻片前后側動,如出現凝集現象,
應以0.9％氯化鈉溶液與同株培養物作對照試驗,無凝集現象時判為血清凝集陽性。時有
反應遲緩，需將玻片與濕棉球置平皿內，約過20分鐘，再觀察。仍未出現凝集時，應取
斜面培養物，置含少量0.9％氯化鈉溶液的試管中，制成濃菌懸液，在100℃水浴中保溫
30分鐘，待冷，再作凝集試驗。如出現凝集，應判為陽性，否則為陰性。
   上述各項試驗反應，一般應為硫化氫陽性（或陰性），靛基質陰性，尿素酶陰性,氰
化鉀陰性，賴氨酸脫羧酶陽性，動力檢查陽性，A～F“0” 多價血清凝集試驗陽性。各
鑒定結果按表3判定。                          
               表3   沙門氏菌檢查結果判定
──┬─────────────────┬────┬─────────
  序│               血清凝集試驗       │        │
    │             (A～F“0” 血清)     │        │
    ├──┬───────┬──────┤生化試驗│    結  果
    │凝集│  100℃30分鐘 │0.9％氯化鈉 │        │
  號│反應│    凝集反應  │溶液對照    │        │
──┼──┼───────┼──────┼────┼─────────
  1 │陽性│   陽  性     │  陰  性    │  符  合│檢出沙門氏菌
  2 │陰性│   陽  性     │  陰  性    │  符  合│檢出沙門氏菌
  3 │陰性│   陰  性     │            │  不符合│未檢出沙門氏菌
──┴──┴───────┴──────┴────┴─────────
   上述各項試驗任何一項不符合或有可疑反應的培養物,均應進一步鑒定后作出結論。
    (3) 綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)  取膽鹽乳糖培養基3份，每份各100ml，
2份分別加入規定量的供試液，其中1份加入對照菌液作為陽性對照,第3份加入與供試液
等量的稀釋劑作空白對照。培養18～24小時，空白對照應無菌生長,其余2份培養液劃線
接種于十六烷三甲基溴化銨瓊脂培養基平板上，培養18～24小時。當陽性對照的平板呈
現陽性菌落時，供試品的平板無菌落或無疑似菌落生長，可判為未檢出綠膿桿菌。
    綠膿桿菌典型菌落呈扁平、無定形、周邊擴散，表面濕潤，灰白色，周圍時有藍綠
色素擴散。如生長菌落具有上述特征或疑似者，應挑選2～3個菌落，分別接種營養瓊脂
培養基斜面上，培養18～24小時，取培養物革蘭氏染色，并作氧化酶試驗。
    氧化酶試驗  取潔凈濾紙片置于平皿內，用無菌玻璃棒取營養瓊脂培養基斜面培養
物涂于濾紙片上，再滴加新配制的1％二甲基對苯二胺鹽酸鹽試液,在30秒內呈粉紅色逐
漸變為紫紅色為氧化酶試驗陽性。否則為陰性。
    如證實為非革蘭氏陰性無芽孢桿菌或氧化酶試驗陰性，均可判為未檢出綠膿桿菌。
否則，應進行綠膿菌素試驗。
    綠膿菌素(Pyocyanin) 試驗  取上述瓊脂斜面培養物，接種于綠膿菌素測定用培養
基斜面上，培養24小時后，在試管內加氯仿3～5ml,攪碎培養基并充分振搖。靜置片刻,
將氯仿移至另一試管中，加入1mol/L鹽酸溶液約1ml,振搖后，靜置片刻，如在鹽酸溶液
層內出現粉紅色，即為綠膿菌素陽性。試驗同時應有空白對照試驗。
    當空白對照試驗呈陰性時，供試品檢查為革蘭氏陰性桿菌、氧化酶試驗陽性及綠膿
菌素陽性、可判定為檢出綠膿桿菌。
    綠膿菌素陰性的培養物，應繼續以下試驗。
    硝酸鹽還原產氣試驗  取營養瓊脂培養基斜面培養物,接種于硝酸鹽胨水培養基中,
培養24小時，如在培養基的杜氏管中有氣體產生，即為陽性。
    42℃生長試驗 營養瓊脂培養基斜面培養物于0.9％無菌氯化鈉溶液中,制成菌懸液,
再將菌懸液接種于營養瓊脂培養基斜面上，立即置41±1℃水浴中培養24～48小時,有菌
苔生長者為陽性；否則為陰性。
    明膠液化試驗  以接種針沾取營養瓊脂培養基斜面培養物，穿刺于明膠培養基內，
培養24小時，取出置冰箱內10～30分鐘。如培養基仍呈溶液狀，為陽性。
    當革蘭氏陰性桿菌，氧化酶試驗陽性，綠膿菌素試驗為陰性，其硝酸鹽還原產氣試
驗、42℃生長試驗及明膠液化試驗均為陽性時，應判為檢查綠膿桿菌。
    (4) 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)   取亞碲酸鈉肉湯（或營養肉湯）
培養基3份，每份各100ml，2份分別加入規定量的供試液，其中1份加入對照菌液作為陽
性對照，第3份加入與供試液等量的稀釋劑作為空白對照。均培養18～24小時(必要時可
延至48小時)。空白對照應無菌生長。取其余2份培養液劃線接種于卵黃高鹽瓊脂培養基
平板上或甘露醇高鹽瓊脂培養基平板上，培養24～72小時。當陽性對照的平板呈現陽性
菌落時，供試品的平板如無菌落生長，或有菌落但不同于表4所列特征,可判為未檢出金
黃色葡萄球菌。
          表4  金黃色葡萄球菌菌落形態特征
─────┬─────────────────
  培養基  │      菌     落    形     態      
─────┼─────────────────
卵黃高鹽  │金黃色、圓形凸起，邊緣整齊，外圍有
瓊脂      │卵磷脂分解的乳濁圈，菌落直徑1～2mm
─────┼─────────────────
甘露醇高鹽│金黃色，圓形凸起，邊緣整齊，外圍有
瓊脂      │黃色環，菌落直徑約0.7～1mm        
─────┴─────────────────
    如有菌落生長并與表4所列特征相符或疑似時,應挑選2～3個菌落，分別接種于營養
瓊脂培養基斜面上，培養18～24小時，取其培養物革蘭氏染色，并作血漿凝固酶試驗。
    血漿凝固酶試驗  取滅菌小試管3支，各加入血漿①－無菌水(1:1)0.5ml，1支加入
被檢菌株的營養肉湯培養液（或濃菌懸液）0.5ml,其余2支作對照管；1支加入金黃色葡
萄球菌的營養肉湯培養液或菌懸液0.5ml作陽性對照;另1支加入營養肉湯或0.9％氯化鈉
溶0.5ml作空白對照。將3管同時培養。3小時后開始檢查,以后適當時間逐次觀察直至24
小時。空白對照管的血漿流動自如，陽性對照管血漿凝固，試驗管血漿凝固者為陽性；
陽性對照管和空白對照管任何一管不符合要求時，應另制備血漿，重新試驗。
    當空白對照和陽性對照符合要求，供試品的菌株為革蘭氏陽性球菌、血漿凝固酶試
驗陽性，判定為檢出金黃色葡萄球菌。
    結果判斷
    細菌菌落數、霉菌（酵母菌）菌落數、控制菌三項均符合該品種微生物限度項下規
定，應判供試品合格；其中任何一項不符合該品種項下規定，應判供試品不合格。
    細菌菌落數、霉菌(酵母菌)菌落數第一次測定超過該品種項下微生物限度規定時，
應從同一批號樣品中隨機抽樣，復試兩次，以三次結果平均值報告。
    眼科用藥的霉菌和酵母菌菌落數復試報告，須以二次復試結果均不得長菌，方可判
為供試品合格。
    如發現營養瓊脂培養基平板生長霉菌（酵母菌）菌落數或虎紅瓊脂培養基平板上生
長細菌菌落數超過該品種項下微生物限度規定時，應判為供試品不合格。
    各類制劑檢出控制菌或其他致病菌時，按一次檢出結果為準，不再抽樣復試，即應
判該供試品不合格。
    ①  血漿的制備  以無菌注射器吸取滅菌的含5％枸櫞酸鈉的0.9％氯化鈉溶液1ml,
用無菌操作采取家兔（或羊、人）血9ml,輕輕混勻數分鐘。待血液不凝固時，徐徐放入
滅菌離心管中，離心，分離血漿，用滅菌吸管取血漿移至滅菌試管中，置冰箱內備用。
臨用前必須用已知血漿凝固酶試驗陽性的金黃色葡萄球菌測試，證明血漿合格后，方可
用于試驗。

 

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