樣品的稀釋

固體和半固體樣品：稱取25 ?g 樣品置盛有225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質杯內，8000 r/min～10000 r/min 均質1 min～2 min，或放入盛有225mL 稀釋液的無菌均質袋中，用拍擊式均質器拍打1 min～2min，制成1:10 的樣品勻液。

液體樣品：以無菌吸管吸取25 mL 樣品置盛有225 mL ??磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶/（瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠）中，充分混??勻，制成1:10 的樣品勻液。或放入盛有225 mL 稀釋液的無菌均質袋中，用拍擊式均質器拍打1 min～2 min，制成1:10 的樣品勻液。

用1 mL 無菌吸管或微量移液器吸取1:10 樣品勻液1 mL，沿管壁緩慢注

于盛有9 mL 稀釋液的??無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1 支無菌吸管反復吹打使其混合均勻，制成1:100 的樣品勻液。

制備10 倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1 次1 mL 無菌吸管或吸頭。

根據對樣品污染狀況的估計，選擇2 個～3 個適宜稀釋度的樣品勻液（液

體樣品可包括原液）?，在進行10 倍遞增稀釋時，吸取1 mL 樣品勻液于無菌平皿內，每個稀釋度做兩個平皿。同時，分別吸取1 mL 空白稀釋液加入兩個無菌平皿內作空白對照。

?及時將15 mL～20 mL 冷卻至46 ℃的平板計數瓊脂培養基（可放置于46 ℃±1 ℃恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉動平皿使其混合均勻。

培養

瓊脂凝固后，將平板翻轉，36 ℃±1 ℃培養48 h±2 h。水產品30 ℃±1 ℃培養72 h±3 h。

如果樣品中可能含有在瓊脂培養基表面彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養基（約4 mL），凝固后翻轉平板??，進行培養。

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