1 、細菌、霉菌與酵母菌計數
    (1) 平皿菌落計數法  取均勻供試液,進一步稀釋成1:10<2> 、1:10<3>等適宜的稀
釋度。分別取連續三級10倍稀釋的供試液各1ml,置直徑約90mm的平皿中，再注入約45℃
的培養基約15ml，混勻，待凝固后，倒置培養，每稀釋度應作2～3個平皿。
    細菌計數用營養瓊脂培養基，霉菌計數用虎紅瓊脂培養基，酵母菌計數用酵母浸出
粉胨葡萄糖瓊脂培養基，合劑用虎紅瓊脂培養基與酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養基。
    菌數測定空白對照試驗  取供試驗用的稀釋劑各1ml，置4個無菌平皿中，分別按細
菌、霉菌計數用的培養基制備平板、培養、檢查，不得長菌。
    細菌培養時間為48小時,分別在24及48小時點計菌落數,一般以48小時菌落數為準。
霉菌、酵母培養時間為72小時，分別在48及72小時點計菌落數，一般以72小時菌落數為
準。
    營養瓊脂平板一般點計細菌菌落數，虎紅瓊脂平板一般點計霉菌菌落數，在特殊情
況下，前者同時點計霉菌、酵母菌菌落數，后者同時點計細菌菌落數。酵母浸出粉胨葡
萄糖瓊脂平板僅點計酵母菌菌落數。液體制劑同時點計霉菌菌落數及酵母菌菌落數。含
蜂蜜及王漿的合劑的霉菌、酵母菌菌落數分別測定，合并計數。菌落如蔓延生長成片，
不宜計數。
    點計后，計算各稀釋級的平均菌落數，按菌數報告規則報告菌數。
    菌數報告規則  細菌宜選取平均菌落數在30～300之間的稀釋級,霉菌宜選取平均菌
落數在30～100之間的稀釋級作為報告菌數計算的依據。如有1個稀釋級在30～300(30～
100)之間時,將該稀釋級的菌落數乘以稀釋倍數報告；如同時有2個稀釋級在30～300(30
～100)之間時，按下式計算兩級比值。
           高稀釋級的平均菌落數×稀釋倍數
    比值＝────────────────
           低稀釋級的平均菌落數×稀釋倍數
    當比值≤2時，以兩稀釋級的均值報告，當比值＞2時，以低稀釋級平均菌落數乘以
稀釋倍數報告；如同時有3個稀釋級的平均菌落數均在30～300之間時,以后2個稀釋級計
算級間比值報告；如各稀釋級的平均菌落數均不在30～300之間，以最接近30或300的稀
釋級平均菌落數乘以稀釋倍數報告；如各稀釋級平均菌落數均在300(100)以上，按最高
稀釋級菌落數乘以稀釋倍數報告；如各稀釋級平均菌落數均小于30時，一般按最低稀釋
級的菌落數乘以稀釋倍數報告。如當1:10（或1:100 ）稀釋級平均菌落數等于或大于原
液（或1:10稀釋級）時，應以培養基稀釋法測定，按測定結果報告菌數。
    (2) 培養基稀釋法  取供試液（原液或1:10供試液）3份，每份各1ml,分別注入5個
平皿內（每皿各0.2ml）。每1個平皿傾注營養瓊脂培養基約15ml，混勻，凝固后，倒置
培養，計數。每1ml注入的5個平板點計的菌落數之和，即為每1ml的菌落數，共得3組數
據。以3份供試液菌落數的平均值乘以稀釋倍數報告。
    如各稀釋級平板均無菌落生長，或僅最低稀釋級平均菌落數小于1時,則報告菌數為
小于10個。
    
   2 、控制菌檢查  除另有規定外，取供試液10ml(相當供試品1g、1ml 、10cm<2>),
直接或處理后接種，經增菌分離培養后，進行革蘭氏染色、生化試驗與血清凝集試驗項
檢查。
    (1) 大腸桿菌(Escherichia coli)  取膽鹽乳糖培養基3份，每份各100ml,2份分別
加入規定量的供試液，其中1份加入對照菌液作陽性對照，第3份加入與供試液等量的稀
釋劑作空白對照。培養18～24小時（必要可延至48小時）。空白對照應無菌生長。其余
2份培養物劃線接種于曙紅亞甲藍瓊脂平板或麥康凱瓊脂平板,培養18～24小時。當陽性
對照的平板呈陽性菌落時,供試品的平板無菌落生長,或有菌落但不同于表1所列的特征,
可判為未檢出大腸桿菌。
    表 1  大腸桿菌菌落形態特征
───────┬──────────────────
    培養基    │       菌  落  形  態
───────┼──────────────────
曙紅亞甲藍瓊脂│呈紫黑色、淺紫色、藍紫色或粉紅色，
            �々�菌落中心深紫色或無明顯暗色中心，圓
            �々π危�稍凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕
            �々�潤，常有金屬光澤。
───────┼──────────────────
 麥康凱瓊脂�� │鮮桃紅色或微紅色，菌落中心深桃紅色，
 ��           │圓形，扁平，邊緣整齊，表面光滑，濕潤。
───────┴──────────────────
    如生長的菌落與表1所列特征相符或疑似者,應挑選2～3個菌落分別接種于營養瓊脂
培養基斜面，培養18小時，作以下檢查：
    革蘭氏染色  取上述斜面培養物，涂片，固定。以結晶紫染液染色1分鐘,水洗，革
蘭氏碘液媒染1分鐘，水洗，濾紙吸干余水。以乙醇脫色20～30秒鐘,水洗。滴加沙黃染
液復染1分鐘，待干后鏡檢。
    乳糖發酵試驗  取上述斜面培養物，接種于乳糖發酵管，培養24～48小時，觀察產
酸（培養基變色），產氣（杜氏管內有氣泡）。
    靛基質試驗  取上述斜面培養物，接種于蛋白胨水培養基中，培養48±2小時,沿管
壁加入對靛基質試液0.3～0.5ml，液面呈玫瑰紅色為陽性，呈試劑本色為陰性。
    甲基紅試驗  取上述斜面培養物，接種于磷酸鹽葡萄糖胨水培養基中,培養48±2小
時，于每1ml培養液中加入甲基紅指示劑1滴，立即觀察，呈鮮紅色或桔紅色為陽性，呈
黃色為陰性。
    乙酰甲基甲醇生成試驗（V-P 試驗）  取上述斜面培養物，接種于磷酸鹽葡萄糖胨
水培養基，培養48±2小時，于每2ml培養液中加入α-萘酚乙醇液1ml，混勻，再加40％
氫氧化鉀溶液0.4ml，充分振搖，出現紅色為陽性。加試劑4小時內，如出現紅色亦應判
為陽性，無紅色反應為陰性。
    枸櫞酸鹽利用試驗  取上述斜面培養物，接種于枸櫞酸鹽培養基的斜面上，培養48
±2小時,培養基斜面有菌苔生長，培養基由綠色變為藍色時為陽性，培養基顏色無改變
時為陰性。
    當空白對照試驗呈陰性，供試品檢查為革蘭氏陰性無芽孢桿菌；乳糖發酵產酸產氣
或產酸不產氣；IMViC 試驗為陽性、陽性、陰性、陰性或陰性、陽性、陰性、陰性，判
為檢出大腸桿菌。對可疑反應的菌株，應重新分離培養后，再作生化試驗證實。

 

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