1.增菌培養基:國際上采用的為mEC+n、mTS?B+n、EHEC Enrichment Broth (EEB=TSB)+CCV、BPW-V?CC。通過比較,mEC與mTSB差異不大,且為我國“污染物監測網”和“全國腸出血性大腸桿菌O157:H7感染性腹瀉”檢測中普遍使用。
2.增菌培養溫度:國際方法中有3個培養溫度:NM??KL為41.5±0.5℃ 、USDA/BAM 為35±2℃ , 其余為37℃ 。實驗結果表明, 在41.5±0.5℃時,溫度作為一個選擇性因子,能夠抑制雜菌叢的生長,但同時O157也部分地受到抑制。在36±1℃ 時,O157的相對量較多。
3.分離培養基:目前國際上采用的培養基有:SMAC、CT-SMAC、Rainbow agar等,本實驗分別使用了SMAC 、CT-SM?AC 、CHROMagar 、改良CHROMagar 瓊脂平板, 結果表明: 改良CHROMagar >CHROMagar > CT-SMAC > SMAC
4.平板分離方法的選用:
(1)常規方法:FDA、CCFRA方法均使用2塊平板,涂布:?取0.1ml或適當稀釋后的增菌液0.1ml進行,劃線取滿環。?
通過實驗表明, 選擇2 塊平板, CT-SMAC 和改良CHROMagar ,?取增菌液0.1ml先涂布一半,再劃線一半,可以減少操作誤差,得到較好的分離效果。
(2)磁珠?方法(IMS):國際上使用磁珠量為20 μl ,選擇2塊平板, CT-SMAC和改良CHROMagar ,取磁珠懸液各50 μl,先涂布一半,再劃線一半,可以減少操作誤差,同樣得到較好的分離效果。
5. 血清學:使用??O157、H7因子血清鑒別。但哈夫尼亞、變形、異常沙門菌、檸檬酸桿菌等與O157可能有交叉反應,需要用生化進一步鑒定。
6. 生化項目:一般使用Indole、MUG等作為篩選試驗,API20E、VITEK GNI或GNI+作為鑒定試驗。本法??使用TSI、MUG作為篩選,MUG可篩除E.coli、宋內氏、檸檬酸桿菌、腸桿菌、克雷伯氏菌、哈夫尼亞菌、粘質沙雷氏菌、耶耳森氏菌等。TSI可篩除沙門菌、志賀氏??菌、變形、部分普羅菲登氏菌、摩根氏菌等。API20E、VITEK GNI或GNI+作為鑒定試驗。
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