1.增菌培養基:國際上采用的為mEC+n、mTSB+n、 EHEC Enrichment Broth (EEB=TSB)+CCV、BPW-VCC。通過比較,mEC與mT?SB差異不大,且為我國“污染物監測網”和“全國腸出血性大腸桿菌O157:H7感染性腹瀉??”檢測中普遍使用。
2.增菌培養溫度:國際方法中有3個培養溫度:NMKL為41.5±0.5℃ 、 USDA/BAM為35±2℃,其余為37℃。實驗結果表明,在41.5±0.5℃時,溫度作為一個選擇性因子,能夠抑制雜菌叢的生長,但??同時O157也部分地受到抑制。在36±1℃ 時,O157的相對量較多。
3.分離培養基:目前國際上采用的培養基有:SMAC、CT-SMAC、Rainbow agar等,本實驗分別使用了SMAC、CT-SMAC、CHROMagar、改良CHROMagar瓊脂平板,結果表明:改良CHROMagar > CHROMagar > CT-SMAC > SM??AC。
4.平板分離方法的選用:
&nb??sp; (1)常??規方法:FDA、CCFRA方法均使用2塊平板,涂布:取0.1ml或適當稀釋后的增菌液0.1ml進行,劃線取滿環。通過實驗表明,選擇2塊平板, CT-SMAC和改良CHROMagar ,取增菌液0.1ml先涂布一半,再劃線一半,可以減少操作誤差,得到較好的分離效果。
(2)磁珠方法(IMS):國際上使用磁珠量為20 μl ,選擇2塊平板, CT-SMAC和改良CHROMagar ,取磁珠懸液各?50 μl,先涂布一半,再劃線一半,可以減少操作誤差,同樣得到較好的分離效果。
5. 血清學:使用O1??57、H7因子血清鑒別。但哈夫尼亞、變形、異常沙門菌、檸檬酸桿菌等與O157可能有交叉反應,需要用生化進一步鑒定。
6.生化項目:一般使用Indole、MUG?等作為篩選試驗,API20E、VITEK GNI或GNI+作為鑒定試驗。本法使用TSI、MUG作為篩選,MUG可篩除E.coli、宋內氏、檸檬酸桿菌、腸桿菌、克雷伯氏菌、哈夫尼亞菌、粘質沙雷氏菌、耶耳森氏菌等。TSI可篩除沙門菌、志賀氏菌、變形、部分普羅菲登氏菌、摩根氏菌等。 API20E、VITEK GNI或GNI+作為鑒定試驗。