蛋白胨提供氮源；乳糖是選擇性碳源，提供能量，同時產酸引起菌體所帶電荷和培養??基酸堿度的變化；磷酸氫二鉀一方面作為緩沖體系來緩解細菌分解乳糖產酸使pH下降??的趨勢，另一方面為細菌的生長提供K+、PO4³⁺；瓊脂粉為凝固劑。

大腸桿菌分解乳糖產酸，菌??體帶正電，與伊紅結合染上紅色，伊紅與美藍結合使菌落帶上紫黑色并有金黃色金屬光澤。

產氣腸桿菌也利用乳糖產酸，但其產生的??酸可以繼續被分解為醇、醛、酮等，使pH上升，所以它在前??期積累少量酸，使菌落結合了一定的伊紅美藍，繼續培養后pH上升，所以其菌落為淺紅色，很少有金屬光澤。

不分解乳糖的細菌，如沙門氏菌和志賀氏菌，為無色或琥珀色半透明菌落。

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