標本處理
刮取營養平板上的過夜新鮮培養物1 環~2 環,至裝有1 mL0.85%滅菌生理鹽水的Eppendorf 管內?,混勻。??4 ℃~8 ℃,12 000 r/min 離心15 min,棄去上清。沉淀加入100 μL 滅菌去離子水中,混勻。100 ℃煮沸12 min,12 000?? r/min離心5 min,上清即為PCR 擴增模板,可直接用于PCR 反應。
多重PCR
五種致瀉大腸埃希氏菌目的基因多重PCR 擴增加樣體系見表5。PCR 反應條件:預變性94 ℃ 5 min。變?性94 ℃ 30 s,復性63 ℃ 30 s,延伸72 ℃ 1.5min,30 個循環。最后72 ℃延伸5 min
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