諾如病毒核酸檢測

錄入時間:2014-3-20 11:19:20 來源：龙8娱乐官方网站生物

普通RT-PCR檢測

普通RT-PCR反應體系

一步法普通RT-PCR 反應體系見表3。每個反應體系設置兩個平行反應。反應體系中各試??劑的量可根據具體情況或不同的反應總體積進行適當調整。也可采用RT-PCR ??兩步法試劑盒。

以諾如病毒RNA 為陽性對照，以不含有諾如病毒的樣品RNA 作為陰性對照，以水代替模板作為空白對照。

普通RT-PCR反應條件

反應條件為：42 ℃ 60 min；94 ℃ 10 min；94℃ 1 m??in，37 ℃ 90 s，72 ℃1 min，40 個循環；74 ℃ 7 min。

PCR擴增產物的電泳檢測用電泳緩沖液（1×TAE）、0.5μg/mL 溴化乙錠（或GoldView）配1.5%的瓊脂糖凝膠。在電泳槽中加入電泳緩沖液，使液面剛剛沒過凝膠。將9 μL PCR 擴增產物，加1μL 10×上樣緩沖液，點樣，電泳。電

壓根據電泳槽長度來確定，一般控制在3 V/cm～5V/cm，當溴酚藍移動到凝膠邊緣時關閉電源。凝膠成像系統觀察電泳結果，獲取并保存圖像。

實時熒光RT-PCR

實時熒光RT-PCR反應體系

一步法普通RT-PCR 反應體系見表4。反應體系中各試劑的量可根據具體情況或不同的反應總體積進行適當調整。可采用商品化的RT-PCR 試劑盒。

以諾如病毒RNA 為陽性對照，以不含有諾如病毒的樣品RNA 作為陰性對照，以水代替模板作為空白對照。

替模板作為空白對照。

實時熒光RT-PCR反應條件

反應條件為：48℃ 45min；50℃ 2min??；95℃ 10min；95℃ 15 s，56℃ 1 min，45 個循環。

注：不同儀器可根據儀器要求將反應參數作適當調整。