單染色

將熱固定的涂片放在有水槽的染色架上，用Loeffler亞甲基藍溶液染色5min，輕輕淋 洗玻片，用干凈的吸紙或?濾紙吸干。

革蘭氏染色

這是一種復染方法，是對多數細菌進行初步鑒定的基本方法。在該?方法中，先用結晶 紫對涂片染色用碘液媒染,然后用乙醇、丙酮或乙醇和丙酮的復合液脫色，這一步能脫 掉革蘭氏陰性菌體中的紫色，但卻不能使革蘭氏陽性闡脫色，最后用沙黃染液復染，將革 蘭氏陰性菌染成橘紅色。

用這種染色方法對以將細菌分成兩類：

(1) 革蘭氏陽性菌這類菌不能用乙醇脫色，呈現紫色，如鏈球菌、芽孢菌等。

(2) 革蘭氏陰性歯在顯微鏡下呈現粉色，如假單胞菌、大腸桿菌等。

注意：使用菌齡較短的菌株(18~24h)進行革蘭氏染色或采用包括幼齡菌在內的各 種菌齡的菌株做涂片時，因為一些菌株隨??菌齡的變化在革蘭氏染色反應和形態學上會發 生變化：

革蘭氏??染色法有很多改進的形式,例如Silverton和Anderson( 1961), Bloows( 1991) 等。使用的試劑和時間取決于實驗室內部常用菌株的特性,伹使用者的偏愛也對方法的 ?選擇有影響;相對于側重染色操作步驟是否有差異的方法來說，以下介紹的染色方法中 的試劑使用范圍較寬，十分適用于通常的染色。然而，要獲得滿意的染色效果，要嚴格按 照方法的操作步驟進行，尤其在脫色階段。 橾作步驟

(J)將經過18~24h培養的菌株，按常規的方式涂抹一個涂片，并加熱固定；

(2) 用結晶紫染色2mm。注意染色液要覆蓋到所有的涂抹范圍（以下的操作步驟相同)；

(3) 拿住玻片使之成45度角，沖洗掉涂片上所有的結晶紫溶液，然后用碘溶液媒染1min;

(4) 倒掉碘溶液，吸干，拿住玻片成45度角，?用95％的乙醇(或工業甲醇）沖洗玻片，直到不再有紫色溶液從玻片上流下為止(對于薄的涂片來說需要5~15??s)；

(5) 用流水淋洗后用1%的沙黃溶液染色15s;

(6) 將玻片充分洗凈吸干。

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