①在不??含抗生素的奶中按所需濃度加人青霉素溶液，使對照中抗生素濃度與測試的 檢出限制水平一致。以此作為對照管兄外，檢出限還取決于所用菌株的敏感性。使用 枯草芽孢桿菌時，對照管中培養基青霉素的含量為0.05單位/mL;使用嗜熱脂昉芽孢桿 菌(熱乳芽孢桿菌)吋，育霉素含量為0.02單位/mL,

②在40??~50℃吋，將lmL處于指數生長期的營養肉湯培養物加人??5mL熔化的營養 瓊脂培養基中，然后倒人培養皿,置于橾作臺上使之凝固，按要求標記底板。

③使用潔凈干燥的鑷子，將一片無菌空白抗生素紙片(直徑13mm，Difco)浸入充分 混合的樣品中，控掉多余奶液，將紙片放在平板中?合適的位置，沖洗，擦干鑷子，進行對照 和其他樣品的測??試。

④將平皿置于適當的培養溫度（30℃培養枯草芽孢桿菌或50℃培養嗜熱脂肪芽孢?? 桿菌）.直到生出菌落或培養至規定的時間。

⑤檢查平板，將樣品的抑菌圏直徑與對照進行比較，當樣品的抑菌圈直徑小于對照 ??時,樣品合袼；當樣品的抑菌圈直徑等于或大于對照抑菌圏直徑吋，且經內酰胺酶處 理后樣品的抑菌圈直徑小于未用β-內酰胺酶處理的樣品抑菌圏直徑時，樣品中含有 內酰胺類抗生素。當樣品抑菌圏等于或大于對照時,用內酰胺處理后樣品抑菌圏的 大小不變,則應將樣品加熱，破壞樣品中的其他抑制物質，然后再次檢測(或將未經加熱和 加熱的樣品同時檢測）。若樣品中抑制物濃度等于或大于對照濃度時，試驗失敗。

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