培養基pH的測定和調整
所有微牛物都受到其生存環境中PH的影響e通常,選擇性物質的存在會縮小它們 生長的PH范圍。有時,培養基的酸度或堿度也能作為一種生長選擇因子。而對于生化 測試培養基,微生物在基質中顯tk活性的pH的范圍比生長所耑的PH范圍窄:因此,將培養基的PH調至預斯的范圍內是很蓽要的。當實驗室根據培養基成分自己配制培養基 時,必須檢測并調整pH。?必須指出的是,即使是生產廠商提供的現成的合成脫水培養基 (尤其是對些庫存的脫水培養基),在制成實驗用培養基后也需要對其最終PH進行測定。 測定培養基pH的最準確的方法是使用pH計。使用前必須用已知pH的(通常PH 為4〜7)標準緩沖溶液進行校準。將pH計的電極用蒸餾水沖洗后浸入到燒杯的培養基中,就呵以從pH汁的刻度讀出培養基的pH。每個生產廠商對每種不同pH計都提供有 詳細的操作說明。
配制培養基時,使用帶機械攪拌的pH計可以很容易地調整pH?培養基應在能夠不停攪拌的荇器(如大燒杯)中配制,最好使用磁力攪拌器,磁力攪拃器帶有聚乙烯或聚四氟乙烯包裝的磁棒。含瓊脂的培養基需在融化后調整其pH,用可加熱的磁力攪拃器很容易辦到。調節pH時用巳知pH的標準緩沖液溶液先對pH?計迸行 校準。然后將復合電極和電阻溫度計(如果有)置于培養基屮,從燒杯遠離電極的一端緩 慢加入適量的鹽酸和氣氧化鈉,佴到培養基達到并保持所需的pH。
PH計的溫度補償應考慮到溫度對電極系統的影響:在一些稀釋液和培養基中,pH隨溫度的變化而有相當大的變化。對于液體培養基和稀釋液而言,pH通常既可以在 251:下,也可以在其使用時的溫度下調整和測定。
瓊脂培養基必須在溶解后進行PH的調整,溶解的溫度在45t:以上:因此,固體培養 基應在其使用溫度確定pHt.這時應使用平頭的復合電極,同吋用手動校準PII計的溫度補償。在制備培養基時,若測定出培養基在熔化狀態和凝固狀態的pH有所不同時,說明 在調整pH時產生誤差。
同樣,制備的培養基在加熱滅菌處理(如高壓滅菌)時,也可能會產生PH的變化。對 于脫水培養某,生產廠商己考慮到這一點,通常不謠要再調整其pH但應認真核對待用培養基的pH。如果脫水的瓊脂培養基在再次溶解或制備的過程中必須調整pH,那么最 好在滅菌操作步驟之后用過濾滅菌的鹽酸和氫氧化鈉溶液進行調整,以避免造成因再次滅菌而形成的培養基的過度加熱。當用不同的原料或藥品制備培養基時,必須在高壓滅菌后檢測培養基的pH。此外,如果發現培養基的pH在每次高壓滅菌后都發生相同變 化,可在配制培養基時對pH進行適當調整。但仍需測定培養基滅菌后的最終pH。
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