(1)涂片：取一塊干凈的載玻片,并在其中央滴一小滴生理鹽水(或無菌蒸餾水)。接種環在酒精燈上殺菌后從斜面挑取少量菌種(金黃色葡萄球菌或枯草桿菌)與玻片上的水滴混勻后,涂布成一均勻的薄層。涂布面一般以直徑1cm大小范圍為宜。 (2)干燥與固定：涂片最好在室溫下使其自然干燥。亦可在酒精燈上微微加熱,加速水分蒸發,但切勿過熱。固定時,在酒精燈火焰外層盡快地來回通過2~3次,多為2~3s,以載玻片背面不覺燙手為宜,放置待冷后,進行染色。 
(3)染色：在涂片上滴染色液一滴,使染色液覆蓋涂片,染色約1min。 
(4)水洗：斜置載玻片,在來自水龍頭下用小股水線沖洗,直至洗下的水呈無色為止。 
(5)干燥：用吸水紙吸去涂片邊緣的水珠,置室溫下自然干燥或微微加熱,以加快干燥速度。注意用吸水紙時切勿將菌體擦掉。 
(6)鏡檢：用顯微鏡觀察,并用鉛筆繪出細菌形態圖。 
2. 革蘭氏染色法：革蘭氏染色反應是細菌分類和鑒定的重要性狀。 
革蘭氏染色是一種復染色法(由兩種或多種染料染色的方法,稱復染色法,又叫鑒別染色法)。 
革蘭氏染色法(Gram stain)不僅能觀察到細菌的形態而且還可將所有細菌區分為兩大類:染色反應呈藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌,用G+表示;染色反應呈紅色(復染顏色)的稱為革蘭氏陰性細菌,用G¯表示。 

革蘭氏染色需要的試劑主要有草酸銨結晶紫染液、碘液、石炭酸復紅染液、95%乙醇、番紅染液、香柏油、二甲苯。  • 染色流程：制片→干燥→固定→初染→水洗→媒染→水洗→脫色→水洗→復染→水洗→干燥→觀察 

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