平板劃線的操作是為了將菌稀釋從而獲得純培養的單菌落。劃線有多種方式。

1.三區平板劃線

三區劃線中第一區所占的區域大約是平板面積的五分之一~?四分之一，第二區搭過第一區的面積使微生物數量得到“稀釋”，第三區搭過第二區的面積使微生物數量進一步“稀釋”，第三區不可與第一區有重疊的劃線。一般適用于可疑菌的分離，或可疑菌落的二次平板分離。通常劃完三區后就可以出現單菌落。三區劃線示意圖如圖3-20所示。

2.四區平板劃線

四區劃線中前三區劃線與上面的三區劃線??類似，只是每一區的劃線面積相應減小，同樣第三區不可與第一區相重疊，第四區不可與第二區?和第一區相重疊。四區劃線比三區劃線多稀釋一次，這樣通過增加劃線區域，有可能會分離到更多更純的單菌落。

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