(3) 無菌水：取 6支試管，分別裝入 4.5m1 蒸餾水，加棉塞，滅菌。 

2．樣品稀釋液的制備 

3．平板接種培養 

    平板接種培養有澆注平板培養法和涂布平板培養法兩種方法。 

(1) 澆注平板培養法 

1) 取樣 

                                              -4   -5        -6 
    用三支 1ml 無菌吸管分別吸取 10 、10 、和 10  的稀釋菌懸液各 1ml，對號放入編好號的無菌平皿中，每個平皿放 0.2ml。 

    不要用 1ml 吸管每次只靠吸管尖部吸 0.2ml 稀釋菌液放入平皿中，這樣容易加大同一稀釋度幾個重復平板間的操作誤差。 

2) 倒平板 

    盡快向上述盛有不同稀釋度菌液的平皿中倒人融化后冷卻至 45℃左右的培養基約 15 毫升／平皿，置水平位置迅速旋動平皿，使培養基與菌液混合均勻，而又不使培養基蕩出平皿或濺到平皿蓋上。待培養基凝固后，將平板倒置于 37℃恒溫培養箱中培養。 

    由于細菌易吸附到玻璃器皿表面，所以菌液加入到培養皿后，應盡快倒入融化并己冷卻至 45℃左右的培養基，立即搖勻，否則細菌將不易分散或長成的菌落連在一起，影響計數。

(2) 涂布平板計數法： 

    平板菌落計數法的操作除上述傾注倒平板的方式以外，還可以用涂布平板的方式進行。二者操作基本相同，所不同的是后者先將培養基融化后倒平板，待凝固后編號，并于 37℃左右的溫箱中烘烤 30min，或在超靜工作臺上適當吹干，然后用無菌吸管吸取稀釋好的菌液對號接種于不同稀釋度編號的平板上，并盡快用無菌玻璃涂棒將菌液在平板上涂布均勻，平放于實驗臺上 20—30 min，使菌液滲入培養基表層內，然后倒置于的恒溫箱中培養 24—48h。 

    涂布平板用的菌懸液量一般以 0.1ml 較為適宜，如果過少，菌液不易涂布開；過多則在涂布完后或在培養時菌液仍會在平板表面流動，不易形成單菌落。 

4．計數 

    培養 48h后，取出培養平板，算出同一稀釋度三個平板上的菌落平均數，并按下列公式進行計算： 

每毫升中菌落形成單位(cfu)＝同一稀釋度三次重復的平均菌落數×稀釋倍數×5 

    一般選擇每個平板上長有 30—300 個菌落的稀釋度計算每毫升的含菌量較為合適。同一稀釋度的三個重復對照的菌落數不應相差很大，否則表示試驗不精確。實際工作中同一稀釋度重復對照平板不能少于三個，這樣便于數據統計，減少誤差。   

    平板菌落計數法，所選擇倒平板的稀釋度是很重要的。一般以三個連續稀釋度中的第二個稀釋度倒平板培養后所出現的平均菌落數在 50個左右為好，否則要適當增加或減少稀釋度加以調整。