實驗目的： 

1．觀察放線菌菌落特征。 

2．學習并掌握觀察放線菌形態的基本方法。 

實驗內容： 

1．放線菌菌落特征的觀察； 

2．分別用水浸片法、印片法及埋片法觀察放線菌的形態。 

實驗原理： 

    放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類革蘭氏陽性細菌。 常見放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養基表面或深入培養基內生長的叫基內菌絲（簡稱“基絲”），基絲生長到一定階段還能向空氣中生長出氣生菌絲（簡稱“氣絲”），并進一步分化產生孢子絲及孢子。有的放線菌只產生基絲而無氣絲。氣絲色暗，基絲較透明。孢子絲依種類的不同，有直、波曲、各種螺旋形或輪生。在油鏡下觀察，放線菌的孢子有球形、橢圓、桿狀或柱狀。能否產生菌絲體及由菌絲體分化產生的各種形態特征是放線菌分類鑒定的重要依據。 

    放線菌的菌落早期和細菌菌落相似，后期形成孢子菌落呈粉狀、干燥，有各種顏色，呈同心圓放射狀。 

實驗器材：

顯微鏡、載玻片、酒精燈、接種環、0.1％美藍染液、蓋玻片、培養皿、高氏一號瓊脂培養基、鏈霉菌平板培養物等。 

實驗步驟：

1．放線菌菌落形態觀察 

    觀察放線菌菌落表面形狀、大小、顏色、邊緣，以及有無色素分泌到培養基內等；并用接種環挑取菌落，注意菌絲在培養基上著生的緊密情況。區別基內菌絲、氣生菌絲及孢子絲的著生部位。 

2．取放線菌培養平板，選擇菌絲和孢子生長較薄的部位，直接置于顯微鏡下觀察。先用低倍鏡，再用高倍鏡。注意放線菌菌絲直徑的大小，孢子絲的形狀。 

3．水浸片法的制作及觀察 

(1) 取潔凈載玻片，滴加生理鹽水一滴。 

(2) 用接種環挑取經過 28—30℃培養 4-5d 的放線菌菌落少許，置于載玻片的生理鹽水滴內。 

(3) 取潔凈蓋玻片一塊，先將蓋玻片一端與液滴接觸，然后將整個玻片慢慢放下避免產生氣泡。置于顯微鏡下先用低倍鏡再用高倍鏡觀察。 

4．印片法的制作及觀察 

    取鏈霉菌劃線培養的平板，用鑷子取一潔凈蓋片，輕放在菌落表面按壓一下，使部分菌絲及孢子貼附于蓋片上。在載片上加一小滴 0.1％美藍染液，將蓋片帶有孢子的面向下，蓋在染液上，用吸水紙吸去多余的染液，置于顯微鏡下先用低倍鏡再用高倍鏡觀察。 

5．埋片法的制作及觀察 

(1) 倒平板：取融化并冷卻至大約 50℃的高氏Ⅰ號瓊脂約 20ml倒平板，凝固待用。 

(2) 接種：用接種環挑取菌種斜面培養物 （孢子）在瓊脂平板上劃線接種。劃線要密些，以利扦片。 

(3) 扦片：以無菌操作用鑷子將滅菌的蓋玻片以大約 45°角扦入瓊脂內 （扦在接種線上），扦片數量可根據需要而定。 

(4) 培養：將扦片平板倒置，28℃培養，培養時間根據觀察的目的而定，通常 3～5d。 

(5) 鏡檢：用鑷子小心拔出蓋玻片，擦去背面培養物，然后將有菌的一面朝上放在載玻片上，直接鏡檢。 

實驗結果及討論 

1．實驗結果 

(1) 描述放線菌的菌落特征。 

(2) 繪制放線菌的個體形態圖，并注明各部位名稱。 

2．討論 

    針對實驗原理、步驟、現象進行討論。 

實驗作業： 

1．試比較幾種觀察放線菌方法的優缺點。 

2．放線菌與細菌菌落最顯著的差異是什么? 

3．鏡檢時，你如何區分放線菌的基內菌絲和氣生菌絲？

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