目的要求:
1.掌握組織培養實驗室的設計
2.掌握組織培養常用的實驗儀器設備及其使用方法
3.掌握調控組織培養的主要環境條件
2.1 實驗室
組織培養實驗室包括:
洗滌室完成玻璃器皿等儀器的清洗、干燥和貯存。
準備室完成培養基制備以及試管苗出瓶、清洗與整理工作。配備儀器設備有:
1)普通冰箱 主要用于貯存母液、各種易變質、易分解的化學藥品以及植物材料等。對一些易結晶物質使用前要經加溫處理。
2)分析天平
3)電蒸餾水器 。
4)磁力攪拌器 磁力攪拌器用于加速攪拌難溶的物質,如各種化學物質、瓊脂粉等 。磁力攪拌器還可加熱,使之更利于溶解。
5)酸度計
6)高壓滅菌鍋
7)恒溫培養箱 內有溫度感受器,控制箱內溫度到所調指標生化培養箱還配有光照裝置,用于植物材料的培養。
接種室是完成植物材料的分離接種及培養物轉移。
接種室是完成植物材料的分離接種及培養物轉移。
接種室宜小:密閉光滑,配置拉動門。
接種室要求干爽。吊裝紫外線滅菌燈,最好安裝一小型空調,接種室應設有緩沖間,面積2 m2為宜。
接種室的主要設備及用具有:
1) 超凈臺cleaning table
工作優點:操作方便自如,比較舒適,工作效率高,準備時間短。可長時間使用。
工作原理:功率在145-260W左右,它裝有小型鼓風機,使空氣穿過一個前置過濾器和高效過濾器,除去大于0.3μm的塵埃、細菌和真菌孢子等,最后以較潔凈的氣流吹到工作臺面。超凈空氣的流速為每分鐘24-30m,這已足夠防止附近空氣襲擾而引起的污染,這樣的流速也不會妨礙采用酒精燈對器械等的灼燒消毒。
種類:水平式和垂直式二種型號。
未來機器人接種可免除超凈臺
2) 解剖鏡 用于分離微莖尖可采用雙筒實體解剖鏡。
雙筒解剖鏡在分離莖尖等較小組織時,便于觀察、操作,通常放大5~80倍。 放大40倍以上操作需要有相當熟練的技術和較好的工具。
3) 無菌操作器具 按單人超凈臺計算:酒精燈1個;醫用鑷子(20-25cm )1把;4號解剖刀1把;醫用剪(15cm )1把;酒精消毒瓶(250ml)1支;酒精棉球若干,無菌器皿1個;廢物皿1個;打火機等。
是將接種的材料進行培養生長的場所。培養室大小依規模決定。
培養架規格。
培養架大多由金屬制成,一般設5層,
最低一層離地高約100cm,其它每層間隔30cm左右,培養架即高1.7m左右。
培養架長度都是根據日光燈的長度而設計,如采用40W日光燈,則長1.3m左右,寬度一般為60cm。
培養條件控制
1溫度, 一般保持在20-27℃左右,由空調機調節。由于熱帶植物和寒帶植物等不同種類要求不同溫度,最好不同種類有不同的培養室。2室內濕度也要求恒定,相對濕度以保持在70-80%為好,可安裝加濕器。
2光照安裝日光燈和安裝定時器,一般需要每天光照10-16h。
可白天開燈,也可晚間開燈
.2 設備和器材
1三角瓶,
規格:有100、250、500ml等,一般使用100ml三角瓶,
優點:培養面積大, 利于組織生長,受光也比試管好。由于瓶口較小,亦不易污染。
2培養皿
規格:常用9、12cm直徑,要求上、下能密切吻合。
適于:游離細胞、 原生質體、花粉等的靜置培養、看護培養、無菌種子的發芽、植物材料的分離等。
3試管
規格:常用18×180 mm或20×200mm。
特點:可用于培養較高的試管苗,不易污染。
但培養量較少。
4代用廣口的200ml罐頭瓶,加蓋半透明的塑料蓋,特點:成本較低,操作方便,也減少了培養材料的損傷。
但缺點是易引起污染。
5代用塑料器皿。
??特點:具有質輕?、透明、不易破碎、成本低等優點,如培養容器多為平底方盒形,可提高培養空間利用率。必須是采用聚丙烯材料制成,能耐高溫。缺點透明度不好,不耐過火灼燒。
6瓶口封塞
要求:要具有一定的通氣性和密閉性,以防止培養基干燥和雜菌污染。
1) 以前用棉塞。但這種封口辦法夏季極易污染,且不易保持培養基濕度。
2) 用聚丙烯塑料薄膜,以線繩結扎或橡皮圈箍扎。
為了增加通氣性,可在里面襯一層硫酸紙或牛皮紙。這樣經濟方便, 且通氣好。
3) 也可采用專用的封口膜。
7其它器皿
用處:配制培養基,貯藏母液,材料的消毒等需要各種化學實驗用的玻璃器皿,
種類:包括100、250、500、1000ml燒杯;10、100、1000ml量筒; 100、1000ml試劑瓶(棕色)等等。
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