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布氏桿菌病細菌學診斷技術



錄入時間:2011-10-26 11:07:46 來源:互聯網

 

    WHO實驗室生物安全手冊》??將布氏桿菌列為Ⅲ類危險級。布氏桿菌病是最容易實驗室感染的疾病之一,當處理培養物和嚴重感染樣品(如流產的材料)時要采取嚴格的安全預防措施。羊種布氏桿菌對人有高度致病性,是世界上最嚴重的人畜共患病之一。牛種布氏桿菌對人也具有高度致病性,實驗室操作活的培養物或動物的污染材料是?很危險的,必須在嚴格的生物安全三級或更高控制條件下進行,盡量減少職業暴露。處理??大量布氏桿菌建議使用不低于生物安全三級的控制條件。職業性接觸常致病,通常口、呼吸系統、結膜是主要感染途徑,食人感染的奶制品構成主要的公共衛生危害。獸醫和農民經常接觸感染動物和流產胎兒或胎盤,存在很大的職業危險。

 

    1.樣品收集與培養

    以細菌培養診斷動物布氏桿菌病時,樣品的選擇應以觀察到的臨床癥狀為依據。最有用的樣品包括流產的胎兒(胃內容物、脾、肺)、胎膜、陰道分泌物(陰道沖洗物)、奶、精液、關節炎和水囊瘤液。死后采集樣品的首選組織為網狀內皮組織(如頭、乳腺和生殖器淋巴結及脾)、懷孕后期或生產后早期的子宮、乳房。通常2-3天即可見有菌落生長,如無細菌生長也要培養8-10天才能認為是陰性而棄去。所有樣品采集后??應冷藏并立即用最快的方式運送到實驗室。??送到實驗室時,奶和組織樣品如不馬上分離應冷凍保存。

 

    2.培養特性

    布氏桿菌為需氧菌,對營養要求嚴格,初代分離培養時,須在含肝湯、血清等營養??豐富的培養基上才能??生長。許多實驗室在基礎培養基(如血瓊脂基礎、哥倫比亞瓊脂)中加入血清以促進某些布氏桿菌菌株的生長,如加入2%~5%的牛血清或馬血清,則是牛種布氏桿菌2型生長所必需的。其他合適的培養基還有血清葡萄糖瓊脂(SDA)、甘油葡萄糖瓊脂。該菌生長緩慢,一般需要7一“天或更長時間才能長出肉眼可見的菌落。比較起來,羊種布氏桿菌生長最慢,豬??種布氏桿菌最快,??牛種布氏桿菌介于兩者之間。多次傳代后,不但生長變快(2-3天即可長出菌落),而且對營養要求低,在?普通培養基上也能生長。在血清肝湯瓊脂上,形成濕潤、閃光、表面隆起、邊緣整齊的菌落。直徑12mm。透射光下,菌落呈淺黃色有光澤,半透明。從上面看,菌落微隆起,灰白色。?隨時間推移,菌落變大,顏色變暗。光滑型(S)布氏桿菌在培養特別是繼代培樣時易發生變異而形成粗糙型(R),菌落透明度降低、邊緣粗糙、表面干燥、在折射光下呈暗白或黃色。變異檢查操作簡單,如用結晶紫染色,粗糙型菌落染成紅色;而光滑型菌落染成淺黃色。如果菌落是光滑型的,則應用光滑型??牛種布氏桿菌抗血清或最好用AM表面抗原特異單價抗血清進行試驗。若為非光滑型菌落,分離物應用布氏桿菌R抗原的抗血清進行測試。

 

    3.形態與染色

    該菌初次分離培養時多呈球桿狀,牛?布氏??桿菌、豬布氏桿菌經傳代培養漸呈桿狀,羊布氏桿菌則不變。布氏桿菌多為長06-15gm,寬05-07zm??的球桿菌或短桿菌。??它們多單獨存在,很少成對或成團。布氏桿菌無鞭毛不運動、無菌毛、無芽孢、不形成真正的莢膜。布氏桿菌革蘭染色陰性,一般不發生兩極著染。用改良Ziehl-Neelsen方法染色,布氏桿菌菌體染成紅色,背景為藍色。

 

    4.生化特性

    該菌分解糖類的能力因種類而不同。一般能分解葡萄糖產生少量酸,不能分解甘露糖,不能產生靛基質,不液化明膠,不??凝固紫乳。VP試驗及MR試驗均陰性。有些菌型能分解尿素和產生H2S 

 

 

 

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