一.實驗目的：掌握微生物變異的原理，學習用梯度平板法分離抗藥性突變株 

二.實驗原理：基因突變可分為自發突變和誘發突變。許多物理、化學、生物因素對微生物都有誘變作用。 

基因中堿基順序的改變可導致微生物細胞的遺傳變異。這種變異有時能使細胞在有害的環境中存活下來，抗藥性突變就是一個例子。微生物的抗藥性突變是DNA分子的某一特定位置的結構改變所致，與藥物的存在無關??，某種藥物的存在只是作為分離某種抗藥性菌株的一種手段，而不是引發突變的誘導物。因而在?含有一定抑制生長藥物濃度的平板上涂布大量的細胞群體，極個別抗性突變的細胞會在平板上生成菌落。將這些菌落挑取純化，進一步進行抗性試驗，就可以得到所需要的抗藥性菌株。抗藥性突變常用作遺傳標記，因而掌握分離抗藥性突變株的方法是非常重要的。 

 為了便于選擇適當的藥物濃度，分離抗藥性突變株常用梯度平板法。本實驗用梯?度平板法分離大腸桿菌抗鏈霉素突變株。 

三. 實驗用品：參考實驗教材上的實驗用品。 

四.實驗操作： 

（1）取一個已經滅菌的空平皿，把培養皿斜放(一邊墊起)，在無菌條件下倒入不含藥物的底層培養基（10mL LB培養基）； 

（2）待平板中的培養基凝固后將平皿放平，再倒入含有鏈霉素的上層培養基（10mL LB培養基，含有鏈霉素100μg/mL）； 

備注：這樣便得到鏈霉素濃度從一邊到另一邊逐漸降低的梯度平板。 

（3）取一支大腸桿菌液體培養物，用移液管移取0.2mL菌液到梯度平板上，進行涂布。 

（5）將平板倒置于37℃培養2天；觀察經一次培養的梯度平板上大腸桿菌的生長情況。 

（6）選擇平板上1～2個生長在梯度平板中部的單個菌落，用無菌接種環接觸單個菌落朝高藥物濃度的方向劃線。 

（7）將平板倒置于37℃培養2天；觀察經二次培養的梯度平板上大腸桿菌的生長情況。  

五.注意事項： 

玻璃涂布棒在火焰上灼燒后要待其冷卻后再進行涂布，以免燙死細胞；可以蘸上乙醇后在火焰上灼燒，以縮短冷卻的時間。

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