【摘要】  　　目的用不同菌種發酵和用纖維素酶預處理溪黃草，初步探討發酵對溪黃草抑菌效果影響的機制，為開發廉價的食品添加劑，抑菌藥物和節約藥材資源提供新的研究途徑。方法對溪黃草進行發酵等處理后，檢測其醇提物的抑菌作用。結果微生物發酵對溪黃草抑菌效果存在一定的影響，酵母發酵能明顯提高抑菌效果，與用纖維素酶處理的效果相似。結論利用合適菌種發酵提高藥材有效成分的利用率是可行的。  

【關鍵詞】  發酵； 溪黃草； 抑菌效果 

　　溪黃草系唇形科香茶菜屬植物Rabdosia serra (Maxim.)Hara，由于和中藥大辭典上所收錄的中藥溪黃草的原植物線紋香茶菜Rabdosia striatus (Benth.) Kodo外形相似而常作溪黃草入藥，而且是廣東藥材市場上中藥溪黃草的主流品種之一，用于清熱利濕、涼血散瘀，治療急性黃疸性肝炎、急性膽囊炎等［1］。   

　　目前關于溪黃草抑菌效果方面的研究，主要考慮將溪黃草的提取物作為一種健康的食品添加劑。姚勇芳［2］研究了溪黃草中抑菌物質的最佳提取條件，并驗證了溪黃草的乙醇提取物對大腸桿菌具有抑制作用，對霉菌抑制效果不明顯；戰宇等［3］研究了溪黃草提取物的抑菌效果；梁盛年等［4］測定了溪黃草乙醇提取物的體外抗菌活性；段志芳等［5］還證實溪黃草水提物對楊桃果實具有一定的保鮮作用。 

　　發酵法一直是中藥炮制方法之一，隨著科學技術的發展，發酵法應用范圍更加廣泛。這種方法借助微生物的作用，改變中藥原有藥性，提高療效，降低毒副作用，擴大適應癥［6，7］。本研究以枯草桿菌、乳酸菌和酵母菌為發酵菌種，研究發酵后的溪黃草醇提物對細菌和霉菌生長的抑制效果，為??高效提取溪黃草抑菌有效成分，大規模生產高效、低毒、廣譜而經濟實用的食品防腐劑、抑菌藥物以及對于循環利用和處理每年藥廠大量廢棄的藥渣提供了新的途徑和方法。 

　　1  材料 

　　溪黃草購自梅州市溫記百草堂，經嘉應學院生命科學學院廖富林教授鑒定為Rabdosia serra (Maxim.)Hara。美樂多購自梅州市太平洋商場。干酵母粉, 廣東丹寶利酵母有限公司 。 枯草桿菌、JY-LZ乳酸芽孢桿菌、大腸桿菌、白葡萄球菌、黑曲霉、青霉菌保藏于嘉應學院生命科學學院實驗室。纖維素酶（綠色木酶），酶活力>15μ/mg，上海伯奧生物科技有限公司。 

　　2  方法 

　　2.1  工藝流程溪黃草→粉碎→稱取5 g→加入水或培養基→高壓滅菌(121℃，20 min)→按10%接種量接種發酵菌種→于培養箱中靜止10 d→提取→測定抑菌活性。 

　　2.2  發酵 

　　2.2.1  種子培養基枯草桿菌種子培養基：蛋白胨1%；牛肉膏0.3%；氯化鈉0.15%；pH 7.0；蒸餾水配制；121℃濕熱滅菌20 min。   

　　乳酸芽孢桿菌培養基：酵母膏1.0％；蛋白胨1.0％ ；葡萄糖1％；磷酸氫二鉀0.05%；硫酸鎂0.1%；硫酸錳0.05%；pH7.0；121℃濕熱滅菌20 min。 

　　酵母菌培養基：去皮馬鈴薯20%，葡萄糖2%，蒸餾水配制，121℃濕熱滅菌30 min。 

　　2.2.2  發酵培養基枯草桿菌發酵培養基：蛋白胨1%；葡萄糖1%；牛肉膏0.3%；氯化鈉0.5%；pH7.0；蒸餾水配制；121℃濕熱滅菌20 min。　　

    乳酸芽孢桿菌培養基：酵母膏1.0％；蛋白胨1.0％ ；葡萄糖2.5％；磷酸氫二鉀0.05%；硫酸鎂0.1%；硫酸錳0.05%；pH7.0；121℃濕熱滅菌20 min。   

　　美樂多乳酸菌培養基：雀巢脫脂奶粉2%；葡萄糖1%；蒸餾水配制；121℃濕熱滅菌15 min。   

　　酵母菌培養基：去皮馬鈴薯20%，葡萄糖2%，蒸餾水配制，121℃濕熱滅菌30 min。 

　　2.2.3  種子培養將活化后的斜面枯草桿菌、乳酸芽孢桿菌分別挑取兩接種環于相應的液體培養基中，接種后分別置于37℃培養箱中培養24 h。 

　　2.2.4  發酵培養稱取5 g粉碎的溪黃草于100 ml的三角瓶內，加入30 ml蒸餾水， 121℃滅菌20 min。每瓶加入種子菌液3 ml，于適宜的溫度下靜止培養。同時做4種對照，即有5組實驗：Ⅰ：溪黃草+水+菌；Ⅱ：溪黃草+水；Ⅲ：溪黃草+培養基+菌； Ⅳ：溪黃草+培養基；Ⅴ：培養基+菌。   

　　發酵：將枯草桿菌系列，乳酸芽孢桿菌系列，美樂多乳酸菌系列置于(36±1)℃的恒溫培養箱中靜置10d，干酵母菌系列于(28±1)℃的恒溫培養箱中靜置10 d。 

　　2.2.5  發酵前后菌數量的檢測平板計數法，3個重復。 

　　2.3  抑菌物質的提取稱取5 g的溪黃草置于3角瓶中，加入30 ml 95%的乙醇，于70℃的恒溫水浴鍋中水浴2 h后，濾紙過濾，取濾液，將其于同溫度的水浴鍋中揮干濃縮至稠膏狀，再加入95%的乙醇溶解并定容至10 ml。定容后放入冰箱中保藏備用。 

　　發酵后的4個系列4 800 r/min離心20 min，固形物按上法處理。 

　　纖維素酶處理及抑菌物質提取：分別稱取纖維素酶0.010 8 g和0.031 0 g，加入含5g溪黃草和30ml蒸餾水的三角瓶中，加入后放入55℃的恒溫水浴鍋中，水浴2 h后取出，濾紙過濾，濾渣按上法處理。 

　　2.4  抑菌活性的檢測指示菌種活化后用無菌生理鹽水制成106～107 cfu/ml菌懸液。　　

　　取0.2 ml菌懸液涂布于牛肉膏蛋白胨或PDA培養基上，靜置10min。 

　　待測樣品用無菌毛細吸管吸取管長的1/3后，滴于直徑為5 mm的無菌濾紙片上，每個平板上貼3片，分別做兩個平行。95%乙醇作對照。   

將貼了濾紙片的平板放入恒溫培養箱中，靜置30 min后倒置培養，大腸桿菌和白葡萄球菌培養24 h取出，黑曲霉和青霉培養48h后取出，用游標卡尺測量其抑菌圈直徑。

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