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微生物細胞的實驗方法



錄入時間:2011-9-21 11:01:32 來源:醫學教育網

 

   1)視待測菌懸液濃度,加無菌水適量稀釋(斜面一般稀釋到102),以每小格的菌數可數為度。 

  (2)取潔凈的血球計數板一塊,在計數區上蓋上一塊蓋玻片。 

  (3?)將酵母菌懸液搖勻,用滴管吸取少許,從計數板中間平臺兩側的溝槽內沿蓋玻片的下邊緣滴入一小滴(不宜過多),讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數區,勿使氣泡產生,并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計數區上,注意不要使計數區兩邊平臺沾上菌懸液,以免加蓋蓋玻片后,造成計數區深度的升高。然后加蓋蓋玻片(勿使產生氣泡)。 

  (4?)靜置片刻,將血球計數板置載物臺上夾穩,先在低倍鏡下觀察到計數區后,再轉換高倍鏡觀察并計數。由于活細胞的折光率和水的折光率相近,觀察時應適當關小孔徑光闌并減弱光照的強度。 

  (5)計數時若計數區是由16個大方格組成,按對角線方位,數左上、左下、右上、右下的4個大方格(即100小格)的菌數。如果是25個大方格組成的計數區。除數上述四個大方格外,還需數中央1個大方格的菌數(即80個小格)。如菌體位于大方格的雙線上,計數時則數上線不數下線,數左線不數右線,以減少誤差。 

  (6)對于出芽的酵母菌,芽體達到母細胞大小一半時,即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復計數23次(每次數值不應相差過大,否則應重新操作),求出每一個小格中細胞平均數(N),按公式計算出每mLg)菌懸液所含酵母菌細胞數量。 

  (7)測數完畢,取下蓋玻片,用水將血球計數板沖洗干凈,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免損壞網格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風機吹干,放入盒內保存。

 

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