四、針對污染源常使用的防治方法
A. 種類
1. 熱療-對病毒較有效但須花費時間。處理時,需6-12星期在30-40℃。
2. 冷療法-亦對病毒有效。
3. 利用抗生素。
4. 以分生組織,不帶病毒等污染源。
5. 利用培養基中高糖,高鹽的濃度。
6. 利用抗并毒藥物。
7. 營養需求不同。
8. 利用水。
9. 抽樣檢測。
B. 防治方法之效果討論
1. 熱療法及冷療法
對病毒有效,但須花時間處理,例如:熱療法處理時間需花6-12星期在30-40℃。
2. 利用抗生素
這是目前較常用的方法,但是在抗生素加入培養基,其有效濃度常??因植物具有半滲透功能,而使濃度無法達到有效濃度。使用抗生素時,??需注意下列事項:
(1)要知道抑制的微生物為何,再使用抗生素,及對癥下藥。
(2)要決定最小抑制濃度,以降低成本。
(3)要確定抗生素不會對植物造成并害或突變。
(4)確定抗生素在培養基上是否有作用。
(5)使用時,常因需要而多種混合或交替使用。
(6)有些抗生素在某些國家是禁止使用,使用前必須做詢問此藥劑是否合法使用。
使用抗生素的缺點
(1)可能對哺乳類動物有害。
(2)若是使用生長期較長的植物,微生物亦有抗藥性產生。
(3)容易錯誤使用:沒有針對微生物而使用各種不同的抗生素。
抗生素的種類 對象
抑制細胞壁合成
Bactracin G(+),殺菌,對抗β-lactams的菌有作用
β-lactams G(+),殺菌,若用10-100倍,則對G(-)有效
Glycopeptides G(+),殺菌,但恨貴,不易有抗藥性
抑制膜的形成
plymixins 對G(-)Psedomonas spp.有效
抑制蛋白質的合成
Ghloramphrnical 殺菌作用,便宜,但對植物有毒害作用
Aminoglyco??sides 使??用對象廣泛,對植物有毒害作用,在堿性環境下較有活性可針對G(-)可和盤尼西林(pencillins)一起作用
Macrolides and 對G(+)有靜菌作用
Lincosamides
Tetracyclines 為靜菌作用,對G(+)、G(-)都可以會刺激菌,植物有害對
核酸抑制物質
Qutnolnes ??殺菌,對 G(+)有效,10-100倍濃度則對G(-)有??效,有抗藥性產生,可引起過敏反應易
Rifampicin 殺菌,對一些G(+)或G(-)的細菌有作用,但常有抗藥性產生
Trimethoprim 對于一些 G(+)或G(-)的細菌有作用,Trimethoprim
Sulphonamides Sulphonamides兩種混合使用有加強的作用
Sulphonamides在堿性環境下較活躍
3. 分生組織法
主要是針對在植物內部寄主的菌類,如病毒等。因其生長速度無法長到頂芽的分生組織,所以在頂芽的分生組?織則無病原菌存在。可以利用此分生組織培養成植株即可避免??感染問題。
4. 利用培養基中高鹽或高糖的濃度
在培養基中有一些高鹽或高糖的濃度可抑制微生物生長,或有單寧酸的存在時也可以達到抑制效果。
5. 利用抗病毒藥物
Ribaririn-對于ssRNA病菌有抑制作用,但是價格昂貴。
6. 營養需求不同
因為不同的菌類其營養需求不同,因此可利用選擇性培養基可篩選或抑制一些微生物。
7. 利用水淹
利用水將植株清洗或是完全浸沒,以避免其上的接種源四處擴散。
8. 抽樣檢測
對于后代植株的抽樣檢測,可將污染嚴重的個體去除。以上這些方法可以綜合使用,以建立一個清潔的植株。
五、污染所造成的結果
1. 生產成本的提高。
2. 對植株造成傷害。
3. 增加接種源及污染的機率。
六、在組織培養過程各個階段所應注意事項
(1)目前組織培養之流程主要分兩種,如下圖所示:
在此兩種系統中,ModelⅠ和ModelⅡ之比較:
ModelⅠ:先做好一小批產品,再進入量產,此每一單位為一瓶,且自為獨立環境,具區隔性,故有污染時所造成?的傷害不大。
ModelⅡ:其為大容器系統,一旦有污染,則整批無法避免將會受到污染其培養基多為液體狀態。
(2) 各階段注意事項
stage0: 建立干凈的植株,以利下面階段的作業進行。只要建立無菌的植株,則污染的來源便只是來自技術上的失誤。因??此在此階段要將病株丟除,并且將其具較多污染源的植株去掉。一般會選擇較成熟的植株,因其??病征易顯現找到植株后。分離其菌或病原菌,做系列稀釋以決定濃度。
stageⅠ:在stageⅠ的污染可蔓延培養?基,故可利用“視覺”將之選出或丟棄,對于潛伏性或是表現微弱的菌種,需作特別的測試,在此階段,要對一般的微生物作測試及對已知的病原菌作測試,若兩種為負便可進入sta?geⅡ。stageⅡ要把污染的植株去掉,知道病原菌并重復分生組織的培養。
stageⅡ:在此階段中,只有無菌??的植株可繁殖。假設此植株為無菌,?則污染源便來自操作室,故要先丟掉污染后,然后再取樣抽檢。
stageⅢ:如同stageⅡ。
stageⅣ:對后代植株需取樣檢查。
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