總結
一種高效的原核表達載體需要包括一個強大并且可以嚴緊調節的啟動子；一位于翻譯起始密碼子5’端大約9bp的SD序列；位于目的基因3’末端的一個高效轉錄終止子。除此之外，載體還需要一個復制起點，篩選標記和利于對啟動子活性進行嚴緊調節的基因。這種調節元件可以插入載體自身，也可以插入宿主的染色體。其他的元件包括轉錄和翻譯增強子等。這些元件的作用往往具有基因特異性，因此要根據不同的情況加以取舍。龙8娱乐官方网站在綜合國內外研究的基礎上，對有可能影響E.coli中蛋白質高效表達的多種因素進行了總結。盡管目前在E.coli中表達外源基因方面已經有許多重大進展，但仍有許多問題亟待解決。歸納起來主要有以下幾點：
1． 借助于細胞的分子伴侶機制來提高正確折疊的蛋白質的產量。或許可以通過共表達多種分子伴侶編碼基因和通過激細胞內眾多不同的分子伴侶的方法來實現。
2．在E.coli中表達真核膜蛋白和多亞基蛋白質復合物的難題上有待解決。
3． 蛋白質分泌到培養基中的真正和有效機制需要明了。目前已經有多種體系能夠是重組蛋白質分泌到培養基中。其中有些是利用信號肽、融合伴侶和具有穿透能力的因子，這種因子能夠引起外膜的破壞和有限的滲漏。而另外的策略是利用已經存在的分泌通道，來保證更高特異性的分泌。有關這方面的工作需要對E.coli中眾多分泌通道的更多了解。
4． 賦予原核細胞諸如真核細胞那樣進行翻譯后修飾的能力。例如糖基化、磷酸化、乙酰化和酰氨化等。可以通過將合適的真核細胞酶類轉入E.coli中而達到這些目的。
總之，E.coli作為一種原核表達系統具有多方面的優點，加之在許多技術方面的眾多重大進展。E.coli仍然是基礎研究和商業生產重組蛋白質的強有力工具。
上一篇：在大腸桿菌中高效表達外源蛋白的策略（六）
下一篇：在大腸桿菌中高效表達外源蛋白的策略（八）
龙8娱乐官方网站微信公眾號
龙8娱乐官方网站天貓旗艦店
