幾個復性的實例:
1、MHCII JBC 269(47):1994
增溶:16-40mg Protein,8MGdnHCl,16-32mM DTT,1mM EDTA,50mM Tris pH8.037度1hr.
復性:8-16fold dilution to1-5mg/ml Protein.
2、增溶:10mM DTT,0.1%SDS,25mM Tris,200mMGlucine pH8.5.
復性:10倍稀釋到10mM DTT,2mMDodOMalt(dodecyl-beta-D-maltoside),150mMNaCl,10mMTris pH8.0.對起始緩沖液密閉透析16hr,開口透析8hr,對150mMNaCl,10mM Tris pH8.0透析48hr。
3、Bovine Prethrombin-2,JBC 270(1):1990 四對二硫鍵。
增溶:7M GdnHCl,10mMTris pH8.0,1mM EDTA 4mg/ml.
復性:稀釋到100mM Na2HPO4,2 mM EDTA,0.1% PEG,0-4M GdnHCl,0.1 mM GSSG,0.2 mM GSH,pH7.4,0.025 mg/ml Protein.RT 24hr.對4L 25mM sodiumphosphate,2mM EDTA,0.1%PEG,pH7.4 透析3次,溫度4度。
純化:
一般說來,復性液的體積較大,為了減少處理體積,在進行柱純化以前可以先進行硫酸銨沉淀,沉淀在低速離心收集后復溶的鹽濃度較高,可以直接進行HIC純化,目標峰經適當稀釋后(cond<5mS/cm)進行IEX純化,然后通過SEC脫鹽,更換緩沖液,除菌過濾后,在質量合格的情況下便可以進入制劑階段。
當然在復性濃度較高的情況下,也可以直接將復性液進行IEX純化,優點是在純化的同時進行體積的濃縮,為以后的精制創造條件。
從生產的角度看,由于每增加一步純化工序便降低很多收率,所以可過兩到三次柱純化,工藝越簡單越有利于收率的提高。當然這只是一個一般的原則,對于純度要求較高的產品如重組人白蛋白,不得不進行多次純化。
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