五、污染所造成的結果
1. 生產成本的提高。
2. 對植株造成傷害。
3. 增加接種源及污染的機率。
六、在組織培養過程各個階段所應注意事項
(1)目前組織培養之流程主要分兩種,如下圖所示:
在此兩種系統中,ModelⅠ和ModelⅡ之比較:
ModelⅠ:先做好一小批產品,再進入量產,此每一單位為一瓶,且自為獨立環境,具區隔性,故有污染時所造成的傷害不大。
ModelⅡ:其為大容器系統,一旦有污染,則整批無法避免將會受到污染其培養基多為液體狀態。
(2)各階段注意事項
stage0: 建立干凈的植株,以利下面階段的作業進行。只要建立無菌的植株,則污染的來源便只是來自技術上的失誤。因此在此階段要將病株丟除,并且將其具較多污染源的植株去掉。一般會選擇較成熟的植株,因其病征易顯現找到植株后。分離其菌或病原菌,做系列稀釋以決定濃度。
stageⅠ:在stageⅠ的污染可蔓延培養基,故可利用“視覺”將之選出或丟棄,對于潛伏性或是表現微弱的菌種,需作特別的測試,在此階段,要對一般的微生物作測試及對已知的病原菌作測試,若兩種為負便可進入stageⅡ。stageⅡ要把污染的植株去掉,知道病原菌并重復分生組織的培養。
stageⅡ:在此階段中,只有無菌的植株可繁殖。假設此植株為無菌,則污染源便來自操作室,故要先丟掉污染后,然后再取樣抽檢。
stageⅢ:如同stageⅡ。
stageⅣ:對后代植株需取樣檢查。
七、討論
目前組培苗污染實驗所遇到的問題為不易建立植株的干凈度,因此無法確定真正的污染源來自何處,無法對癥下藥。而且對于菌種的鑒定有很大的困難,因為一般有關植物或是植物病原菌,因為有錢人的資料留下,可叫易鑒定。但是對于目前一般在大氣中生存的微生物,其背景資料較少,對于鑒定而言,便較棘手。而且目前商業化的test kites一般都是針對人體或是食品方面。對于可應用于植物的test kites太少。且使用ELISA或分子診斷,則因專一性太強,一旦有別種的微生物出現,則造成了無法偵測到而逸出。
由上述這些資料可得知在組織培養的過程中,上流的技術會影響到下流的產量,而污染問題常在整個制造過中占有一定比例。對于如何控制污染,亟欲警系統的建立,和建立一個良好的工作環境,訓練素質優良的員工,和干凈的植株系統為組培業所要努力的方向。
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