單核細胞增生李斯特氏菌

    單核細胞增生李斯特氏菌（簡稱LM?）是一種人畜共患病的病原菌。感染后主要 表現為敗血癥、腦膜炎和單核細胞增多。是冷藏食品威脅人類健康的主要病原菌之一。 

1．常規分離鑒定技術

    常規檢查：直接涂片檢查可見革蘭氏陽性短桿菌。

    細菌學檢查：食品、水等相關食源性標本檢測按照[GB/4789-2003]方法進行，其它標本直接分離于TSA-YE或其它李斯特氏菌選擇性瓊脂平板，在有氧環境下培養，30℃培養24-48h后，選擇典型菌落進行生化鑒定及動力試驗。 

    小鼠毒力試驗：將分離的菌株接種到10mlTSB-YE肉湯中，35℃培養24h，將培養物離心、濃縮，用1ml生理鹽水制成菌懸液（濃度為1010個菌/ml），取0.1ml腹腔注射體重為16-18g小鼠,每組5個觀察7d內小鼠死亡情況。用已知致病的LM和非致病的英諾克李斯特氏菌相同方法進行，做對照試驗。 

    協同溶血試驗：在羊血瓊脂平板上平板接種β-溶血金黃色葡萄球菌和馬紅球菌，在它們中間垂直劃線接種可疑菌，與兩線相近但不相關，在30℃培養24h-48h，檢查平板中垂直接種點對溶血環的影響。靠近金黃色葡萄球菌接種點的LM的溶血增強，西爾李斯特氏菌的溶血也增強，綿羊李斯特氏菌在馬紅血球附近的溶血增強。 

    毒力基因鑒定：包括Hly、PlcA、PlcB、ActA、PrfA、Inl、Iap和Mpl等。以上基因檢測，均可使用PCR方法進行。所用引物，可采用國際、國內、或著名刊物公開發表的引物。模板DNA的提取可采用熱裂解法，經過PCR擴增和凝膠電泳對擴增產物的鑒定，判斷被測菌是否攜帶相關的毒力基因。PCR檢測：用PCR技術對LM的特異性進行研究，經引物LA1和LB2、LMIR和LM3F擴增產生區別于其它革蘭氏陽性菌及革蘭氏陰性菌的590bp，340bp的片段，為Lm的特異性檢測提供了依據。 

2．分子流行病學分型方法

    血清型分型：根據菌體（O）抗原和鞭毛（H）抗原，將LM分成16個血清型，分別是1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、4c、4d、4e、5、6a、6b和7。致病菌株的血清型一般為1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b和5。 

    方法為將待鑒定菌接種到TSA-YE瓊脂斜面菌苔洗下，菌懸液于80℃水浴中加熱1h，以2500r/min離心30，棄去上清液，將剩余液與沉淀混勻制成菌懸液，進行血清學玻片凝集試驗。 

    脈沖場電泳（PFGE）分型：LM的血清型能用PFGE圖譜反映。Ojeniyi等認為，同一個PFGE亞型的LM的血清型是相同的，但相同血清型的LM菌株PFGE亞型則并不一定相同。PFGE分型較血清分型、酶電泳分型、RT、RAPD分型方法的分型能力均強。但建立PFGE電泳系統的花費昂貴，不利于其在流行病學調查中的大規模應用。 

    隨機引物擴增DNA多態性分析（RAPD）分型技術：RAPD分型法對于某一地區及不同地區間李斯菌暴發或散發流行病學的研究、發現新的流行株及其來源都有重要意義。但是由于采用的引物短，T值低，擴增結果易受到外界因素的影響，實驗的重復性較差。

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