(1)直接鏡檢:
①直接涂片染色:將標本涂片,固定后用1∶10稀釋石炭酸復紅染色和革蘭氏染色,鏡檢有無典型弧菌。典型霍亂弧菌互相連接平行排列,有如“魚群”。
?②懸滴標本:將標本制成懸滴(點擊查看懸滴標本制作方法),鏡檢細菌動力,最好用暗視野顯微鏡。霍亂弧菌運動活潑,呈小魚穿梭狀。
(2??)分離培養:將吐瀉物直接或先經堿性胨水增菌后,接種于慶大霉素瓊脂等培養基,容易檢出霍亂弧菌。應用熒光抗體檢測糞便中霍亂弧菌,可于1~2小時內獲得結果。
(3)血清學檢查:可作血清凝集試驗。在發病第1~3日及第10~15日各取1份血清,若第2份血清的抗體效價比第1份增高4倍或4倍以上,有診斷參考價值。
(4??)制動試驗——快速診斷:在急性病人的水樣便中含有大量弧菌,如懸滴檢查陽性,再滴加不含防腐劑的霍亂多價血清(使用濃度為1∶64),幾分鐘內細菌運動停止,凝集成塊即為陽性。
霍亂弧菌檢測流程:
1、懸滴試驗:霍亂弧菌在高倍鏡下運動異常活躍,如流星狀,迅速穿過一高倍視野。
2、免疫制動試驗:若標本檢查發現動力典型,可做制動試驗。將米泔水樣便與多價O免疫血清各一滴混合均勻后做懸滴檢查。若為陽性,可于3-5分鐘內停止運動,并凝集成塊。(多價O血清在體液室冰箱玻璃瓶中)
3、霍亂弧菌培養
?? 米泔水樣便
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?拭子放入堿性蛋白胨水(在生物安全柜旁冰箱門上)做好登記(專用本子,姓名、年齡、性別、癥狀、地址)寫上接種時間
?? ↓
若混濁生長轉4 號瓊脂(在生物安全柜旁冰箱盒中,盒上標有O2培養基)寫上轉種時間
? ↓
可疑菌做血清學試驗(診斷血清在生物安全柜旁冰箱冰凍層)
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